[發(fā)明專利]抗CD20抗原的嵌合抗原受體及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710618293.3
• 申請日: 2017-07-26
• 公開（公告）號: CN109306013B
• 公開（公告）日: 2020-09-25
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 不公告發(fā)明人
• 申請（專利權(quán)）人: 重慶精準(zhǔn)生物技術(shù)有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/867;C12N15/66;C12N5/10;A61P35/00;A61P35/02
• 代理公司: 北京元本知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11308
• 代理人: 黎昌莉

本發(fā)明屬于基因工程領(lǐng)域，具體涉及一種抗CD20抗原的嵌合抗原受體及其應(yīng)用。抗CD20抗原的嵌合抗原受體，其特征在于，由識別CD20抗原的多肽(scFv)，鉸鏈區(qū)，跨膜區(qū)和胞內(nèi)信號域依次連接組成；所述識別CD20抗原的多肽(scFv)的氨基酸序列如SEQ ID NO.14所示。本發(fā)明提供的抗CD20抗原的嵌合抗原受體在免疫細(xì)胞中表達(dá)后，可以有效的清除表達(dá)CD20抗原的腫瘤靶細(xì)胞，能維持靶向CD20分子通過結(jié)合細(xì)胞表面的CD20分子達(dá)到殺滅B淋巴細(xì)胞的效果并且能夠加強CAR?T的增殖和殺傷腫瘤的能力，并且對抗原陰性的細(xì)胞無毒副作用，能夠用于腫瘤的靶向治療。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于基因工程領(lǐng)域，涉及抗CD20抗原的嵌合抗原受體及其應(yīng)用，還涉及包含抗CD20抗原的嵌合抗原受體的慢病毒載體和應(yīng)用。

背景技術(shù)

慢性淋巴細(xì)胞白血病(chronic lymphocytic leukemia，CLL)是一種成熟B淋巴細(xì)胞克隆增殖性腫瘤，以淋巴細(xì)胞在外周血、骨髓、脾臟和淋巴結(jié)聚集為特征。許多高危患者治療時容易復(fù)發(fā)、并且治療存在一定的困難。

非霍奇金淋巴瘤(NHL)是具有很強異質(zhì)性的一組獨立疾病的總稱，在常見惡性腫瘤排位中在前10位以內(nèi)。目前發(fā)病率在不同年齡階段呈明顯上升的趨勢。

CD20抗原是一種B細(xì)胞分化抗原，僅位于前B細(xì)胞和成熟B細(xì)胞，它在95％以上的B細(xì)胞性淋巴瘤中表達(dá)，而在造血干細(xì)胞、血漿細(xì)胞和其他正常組織中不表達(dá)，成為治療淋巴細(xì)胞腫瘤的理想靶點。目前臨床上常用利妥昔與一線化療藥聯(lián)合的方式治療非霍奇金淋巴瘤或慢性淋巴細(xì)胞白血病。利妥昔單抗是靶向CD20分子通過結(jié)合細(xì)胞表面的CD20分子達(dá)到殺滅B淋巴細(xì)胞的單克隆抗體。雖然利妥昔單抗是治療非霍奇金淋巴瘤或慢性淋巴細(xì)胞白血病的非常有效的藥物，然而大多數(shù)患者經(jīng)過藥物治療后依然會復(fù)發(fā)，因此臨床上亟需新型藥物進(jìn)一步改善臨床治療效果，特別是老年患者、并發(fā)癥較多的患者和細(xì)胞遺傳學(xué)特征不良的患者，更加需要新型藥物改善療效。

嵌合抗原受體(chimeric antigen receptor，CAR)是模擬TCR功能的人工受體，包括一個腫瘤相關(guān)抗原結(jié)合區(qū)、一個胞外間隔區(qū)、一個跨膜區(qū)和一個胞內(nèi)信號區(qū)。胞內(nèi)信號域通常為CD3ζ鏈或FcRγ，或與一種或多種共刺激分子相連，如4-1BB(CD137)，CD28，ICOS(CD278)。腫瘤細(xì)胞表面的抗原(受體)與嵌合抗原受體的單鏈抗體(配體)結(jié)合時，通過鉸鏈區(qū)和跨膜區(qū)將信號傳遞至胞內(nèi)，胞內(nèi)信號域?qū)⑿盘栟D(zhuǎn)化為活化信號，激活效應(yīng)細(xì)胞，效應(yīng)細(xì)胞增殖、產(chǎn)生細(xì)胞因子從而殺傷腫瘤細(xì)胞。

利妥昔雖然能夠一定效果的清除表達(dá)CD20的B淋巴細(xì)胞，但是其在體內(nèi)半衰期短，藥物需求量大，并且很多患者最終會產(chǎn)生耐藥。是否可以利用利妥昔靶向CD20陽性血液病的特異性，對利妥昔單抗的多肽結(jié)構(gòu)進(jìn)行嵌合抗原受體(CAR)改造，得到安全有效的靶向CD20的CAR-T細(xì)胞目前并未有研究報道，而是否利妥昔是組合識別CD20單抗中最佳的組合CAR的多肽也需要進(jìn)一步驗證。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供一種抗CD20抗原的嵌合抗原受體，本發(fā)明抗CD20抗原的嵌合抗原受體能夠更穩(wěn)定的表達(dá)于T淋巴細(xì)胞，能更好的清除表達(dá)CD20抗原的腫瘤靶細(xì)胞。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案為：

抗CD20抗原的嵌合抗原受體，其特征在于，由識別CD20抗原的多肽(scFv)，鉸鏈區(qū)，跨膜區(qū)和胞內(nèi)信號域依次連接組成；所述識別CD20抗原的多肽(scFv)的氨基酸序列如SEQ ID NO.14所示。

所述識別CD20抗原的多肽(scFv)的氨基酸序列如SEQ ID NO.14所示或?qū)⑺鲎R別CD20抗原的多肽(scFv)經(jīng)過改造后得到的氨基酸序列。所述識別CD20抗原的多肽(scFv)的改造方法為將識別CD20抗原的多肽(scFv)的CDR植入人源框架的可變區(qū)，再通過多位或單位隨機突變的方式獲得識別CD20的人源化多肽。