[發明專利]檢測鐵皮石斛中多菌靈及甲基硫菌靈殘留方法

在審

• 申請號: 201710608203.2
• 申請日: 2017-07-24
• 公開（公告）號: CN107589183A
• 公開（公告）日: 2018-01-16
• 發明（設計）人: 陳思穎;譚丹;王永林;李勇軍;蘭燕宇;王愛民;楊暢;孫佳;楊傳玉;吳耽;陸苑;李月婷;鞏仔鵬;劉春花
• 申請（專利權）人: 貴州醫科大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 北京聯瑞聯豐知識產權代理事務所(普通合伙)11411
• 代理人: 鄭自群

技術領域

本發明涉及化學檢測領域，具體涉及一種檢測鐵皮石斛中多菌靈及甲基硫菌靈殘留方法。

背景技術

鐵皮石斛在栽培過程中有時會發生病蟲鼠害，特別是高溫高濕季節，病蟲害繁殖快，種植過程中，鐵皮石斛病原性病害主要有真菌性病害、細菌性病害等；炭疽病通常是由于栽植過密、通風不良和環境悶熱引起，主要危害葉片，導致葉面出現黑色病斑，發病嚴重時可導致落葉，嚴重影響鐵皮石斛的生長；此外在夏季高溫高濕或基質偏酸時(種植一段時間后基質會腐爛酸化)易發生白絹病，此病發生時，在基質表面可見絹狀菌絲，并且中心部位形成褐色菜籽樣菌核，植株近基質的莖上會出現黃色至淡褐色的病斑，感染部位腐爛變軟，植株很快死亡和腐爛，形成毀滅性危害。通過對鐵皮石斛種植基地的調研發現，針對此類癥狀，基地常選用多菌靈與甲基硫菌靈對鐵皮石斛感染炭疽病和白絹病進行防治。

多菌靈又稱苯并咪唑44號、棉萎靈等，是一種高效低毒、廣譜、內吸性殺菌劑，是代替銅、汞類殺菌劑的理想葉面噴灑劑和種子處理劑，對菌核病、炭疽病、枯萎病等都有防治效果，是中藥栽培過程中常用的農藥。多菌靈化學性質穩定，能通過作物葉片和種子滲入植物體內，耐雨水沖洗，殘效期長。因此，多菌靈在藥材中的殘留是影響產品質量的重要因素。國內外對果蔬中的多菌靈殘留量檢測已有大量報道，但對中藥材及制劑中多菌靈殘留量的分析報道較少。甲基硫菌靈是一種廣譜性內吸低毒殺菌劑，具有內吸、預防和治療作用。內吸性比多菌靈強，甲基硫菌靈按其化學結構屬取代苯類殺菌劑。

多菌靈和甲基硫菌靈對人體的危害對人、畜有一定毒性可引起抽搐、惡心嘔吐等癥狀。因此，檢測鐵皮石斛中多菌靈與甲基硫菌靈農藥殘留量，確保鐵皮石斛用藥安全是具有必要性的。

發明內容

本發明提出了一種可快速測定鐵皮石斛中多菌靈與甲基硫菌靈農藥殘留量，且有機試劑消耗少，操作更為簡單方便的測量方法。

為了實現上述目的，本發明是通過以下技術方案來實現的：

一種檢測鐵皮石斛中多菌靈及甲基硫菌靈殘留方法，包括以下步驟；

(1)對照品溶液制備：精密稱取多菌靈5mg，甲基硫菌靈2.5mg，置同一10mL量瓶中，加乙腈溶解并定容至刻度，搖勻后，精密量取5mL置于另一10mL量瓶中，用乙腈稀釋至刻度，得對照品溶液；

(2)供試品溶液的制備：精密稱量鐵皮石斛樣品粉末10.0g，置50mL具塞離心管中，加水5mL，0.1％甲酸乙腈15mL，振搖2min后，加入4g無水硫酸鎂，5g氯化鈉后，再次渦旋5min，靜置片刻，第一次離心分離后取上清液5mL，加入50mg無水硫酸鎂、150mgN-丙基乙二胺、50mg十八烷基硅膠和20mg石墨化炭黑，渦旋5min，靜置并第二次離心分離后取上清液2mL，即得供試品溶液；

(3)檢測：將步驟(1)中所得對照品溶液和步驟(2)中所得供試品溶液分別放入液相色譜儀中進行色譜分析，得到色譜圖分析檢測結果。

優選的，所述液相色譜儀中色譜柱參數waters C18，流動相：乙腈與0.02mol/L乙酸銨組成的緩沖溶液；流速為1mL/min，柱溫為35℃，進樣體積為10μL，檢測波長為280nm。

優選的，步驟(2)中所述第一次離心分離的轉速為1000r/min，離心分離時間為5min；第二次離心分離的轉速為1000r/min，離心分離時間10min。

優選的，所述乙腈與0.02mol/L乙酸銨的比例為20:80。

優選的，所述waters C18的規格型號為粒徑5μm，內徑4.6mm，柱長150mm。

優選的，所述色譜圖中峰面積為多菌靈及甲基硫菌靈相應的殘留含量。

本發明檢測鐵皮石斛中多菌靈及甲基硫菌靈殘留方法，其有益效果在于：采用基質分散固相萃取法，能夠大大降低有機試劑的消耗，且操作方便，檢測穩定性好。針對于多菌靈及甲基硫菌靈的檢測具有專屬性，檢測穩定、精密度高，重復性好，為鐵皮石斛安全用藥提供了可靠的依據。

附圖說明

圖1為實施例2中所得的色譜圖；

圖2為實施例3中線性關系考察HPLC圖；

圖3-1和圖3-2分別為實施例3中多菌靈和甲基硫菌靈分工作曲線；

圖4為實施例3中多菌靈及甲基硫菌靈檢出限色譜圖；

圖5為實施例3中多菌靈及甲基硫菌靈定量限色譜圖；

圖6為實施例4中重復性試驗HPLC圖；

圖7為實施例5中穩定性考察HPLC圖。

具體實施方式

下面結合具體實施例及附圖來進一步詳細說明本發明。