[發(fā)明專利]miRNA分子及其抑制劑在調(diào)控骨間充質(zhì)干細(xì)胞成脂分化中的應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710606234.4
• 申請日: 2017-07-24
• 公開（公告）號: CN107189985B
• 公開（公告）日: 2021-02-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張毅;劉偉江;李雪;劉元林;樊月;滕天怡;張偉;王鵬;白博乾;童越
• 申請（專利權(quán)）人: 中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10
• 代理公司: 北京眾合誠成知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11246
• 代理人: 陳波

1.一種促進(jìn)小鼠骨間充質(zhì)干細(xì)胞成脂分化的方法，其特征在于，包括以下步驟：

分離提取獲得小鼠骨片，消化后進(jìn)行原代培養(yǎng)、傳代培養(yǎng)，獲得小鼠骨實(shí)質(zhì)間充質(zhì)干細(xì)胞；

將miR-3963導(dǎo)入傳代培養(yǎng)后的小鼠骨實(shí)質(zhì)間充質(zhì)干細(xì)胞，然后培養(yǎng)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述消化的方法為：將骨片用濃度為0.1％的II型膠原酶，在37℃下，消化30-50min。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述原代培養(yǎng)的方法為：在溫度為37℃、CO₂濃度為5％、濕度為飽和濕度的條件下，采用含10％FBS的α-MEM完全培養(yǎng)基，培養(yǎng)72h后全量換液；培養(yǎng)過程中每2-3d更換一次新的含10％FBS的α-MEM完全培養(yǎng)基。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述傳代培養(yǎng)的方法為：待爬出的細(xì)胞在培養(yǎng)瓶底部融合成單層，達(dá)80％-90％融合度時(shí)，加入胰酶消化，離心，收集的細(xì)胞重新接種于含10％FBS的α-MEM完全培養(yǎng)基，傳代比例為1:2-1:3；所述胰酶的濃度為0.25％；所述離心的轉(zhuǎn)速為1000rpm，時(shí)間為10min。

5.根據(jù)權(quán)利要求3或4所述的方法，其特征在于，所述α-MEM完全培養(yǎng)基中青霉素、鏈霉素的量分別為100U/ml。