[發明專利]一種抑制腫瘤細胞擴散轉移的多肽及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 201710606127.1
• 申請日: 2017-07-24
• 公開（公告）號: CN107188930A
• 公開（公告）日: 2017-09-22
• 發明（設計）人: 馬克里;何欣;黃曉華;馬曉光
• 申請（專利權）人: 大連醫科大學
• 主分類號: C07K14/00
• 分類號: C07K14/00;C07K1/36;C07K1/30;C07K1/20;C07K1/06;C07K1/04;A61K38/16;A61P35/04
• 代理公司: 大連東方專利代理有限責任公司21212
• 代理人: 李銀姬,李馨

技術領域

本發明涉及一種多肽及其制備方法和應用，特別涉及一種具有抑制腫瘤細胞擴散轉移的多肽及其制備方法和應用，屬于生物制藥領域。

背景技術

浸潤轉移是惡性腫瘤主要病理學特征之一，也是惡性腫瘤難于治愈，最終導致病人死亡的主要原因。根據臨床資料和流行病學調查分析，惡性腫瘤在臨床確診時，有40％的患者瘤細胞已發生全身擴散。采用手術、放療技術對原發腫瘤治療的同時，也會導致腫瘤細胞在體內廣泛的擴散轉移。因此，在治療原發腫瘤同時，常輔以化療以殺滅這些擴散的腫瘤細胞。然而，目前常用的化療藥物均有較強的細胞毒性，也是導致病人死亡的原因之一。因此，弄清楚惡性腫瘤細胞擴散轉移的分子機制，尋找抑制腫瘤細胞擴散轉移的藥物靶點，設計新型高效的、低毒的抗腫瘤轉移藥物，以提高惡性腫瘤病人臨床治愈率及提高生存率，是目前惡性腫瘤治療的重要策略之一。

目前已發現多種有抗腫瘤作用多肽，有的已進入臨床前實驗階段，但抑制腫瘤轉移的多肽報道很少。有研究發現，MANS肽(肉豆蔻基富含丙氨酸n末端序列)能有效阻止腫瘤細胞的運動。MANS肽能抑制小鼠肺癌細胞移動或轉移。研究分析，當MANS肽被一種蛋白激酶(蛋白質--肉豆蔻基富含丙氨酸C激酶)被激活時，它結合細胞骨架，也結合肌動蛋白以及細胞膜。使肌動蛋白的運動轉化成細胞的運動。伊利諾伊大學的研究者發現大豆肽lunasin可以明顯降低其結腸癌的轉移，給小鼠口服20mg的大豆肽lunasin可以降低94％的轉移性腫瘤；lunasin同化療藥物奧沙利鉑一起聯合使用可產生更為明顯的結果，可以使得肝臟中的轉移性腫瘤降低6倍。研究者深入研究揭示，lunasin可以滲入到癌細胞中引發其死亡，而且可以和至少一種轉移性癌細胞上的受體進行結合。

多肽類藥物具有分子量小、低毒性、高活性、無免疫原性、易于穿透腫瘤細胞等特點，且能以多種方式給藥、易于多途徑吸收。多肽藥物對人類的健康正做出越來越大的貢獻。有科學家提出21世紀將是多肽的世紀，多肽產業將是21世紀的“朝陽產業”。

發明內容

本發明的目的是基于抗腫瘤多肽分子設計理論和固相化學合成技術，提供一種具有高效、低毒的抗腫瘤轉移活性多肽。

為了實現本發明的目的，本發明提供了如下技術方案：

本發明提供一種抑制腫瘤細胞擴散轉移的多肽，其特征在于，所述多肽的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。分子量為2777.26Da。

本發明還提供本發明所述的多肽在制備抑制腫瘤細胞擴散轉移制劑中的應用。所述制劑可以為本發明所述的多肽，也可以為含有本發明多肽和其他藥學上可允許的輔料的制劑。

本發明還提供所述的抗腫瘤多肽的制備方法，該多肽用固相化學合成法制備得到，包括以下步驟：

(1)將Fmoc保護氨基酸在2-CL樹脂上按預先設計的順序從C端到N端逐個進行偶合并去除Fmoc保護基，得連接有樹脂的多肽鏈；

(2)步驟(1)得到的多肽鏈中加入裂解液，在25～35℃溫度下，反應2-4小時，抽濾，濾液經純化得到多肽粗品。

進一步地，在上述技術方案中，在步驟(1)中所述的將Fmoc保護氨基酸在2-CL-樹脂上偶合并去除Fmoc保護基的方法為：稱取2-CL樹脂放入反應器中，加入DCM，加入Fmoc保護氨基酸和DIEA，用氮氣鼓泡反應3h，然后加入甲醇和DIEA，反應半小時，抽掉反應液，用DMF或DCM洗凈，加入適量哌啶去除Fmoc保護基，得連接有樹脂的多肽鏈。

進一步地，在上述技術方案中，步驟(2)中所述的濾液的純化包括如下步驟：濾液中加入冰乙醚使多肽沉降出來，離心得到多肽粗品。

進一步地，在上述技術方案中，所述的裂解液為87.5％的TFA水溶液。

對于上述制備方法獲得的本發明的多肽粗品用高效液相色譜進一步提純，用質譜儀檢測該序列分子量的正確性。

采用transwell和劃痕法，檢測本發明多肽對人結腸癌sw620細胞、人前列腺癌PC3細胞、人乳腺癌MDA-MB-231細胞、鼠肺癌LLC細胞的體外遷移運動。結果顯示，本發明多肽可以抑制腫瘤細胞體外遷移運動。提示本發明多肽可以抑制腫瘤細胞浸潤及穿透血管壁。

采用尾靜脈注射小鼠肺癌LLC細胞，建立小鼠肺轉移模型，檢測本發明多肽對肺癌轉移形成的影響。結果顯示，本發明多肽在體內可完全阻斷肺癌轉移的形成。

本發明的有益效果：