[發明專利]一種提高巨大芽孢桿菌菌體密度的方法

在審

• 申請號: 201710604592.1
• 申請日: 2017-07-21
• 公開（公告）號: CN107312740A
• 公開（公告）日: 2017-11-03
• 發明（設計）人: 金雪霞;路慶鵬
• 申請（專利權）人: 江蘇綠科生物技術有限公司
• 主分類號: C12N1/38
• 分類號: C12N1/38;C12N1/20;C12R1/11
• 代理公司: 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙)32204
• 代理人: 黃天天

技術領域

本發明屬于微生物領域，具體涉及一種提高巨大芽孢桿菌菌體密度的方法，以提高菌體酸耐受性，保護細胞活性，提高微生物活菌含量的方法。

背景技術

巨大芽孢桿菌在土壤缺磷的情況下，能產生有機酸，產生的有機酸被釋放并積累到細胞外環境中，這些有機酸能夠降低pH值，與鋁、鐵、鎂、鈣、等離子結合，溶解難溶性的磷酸鹽。由于這個功能性特征，在高密度發酵中環境呈酸性極大地降低了其自身的活性，不容易獲得高密度發酵液，也使得酸脅迫成為了巨大芽孢桿菌高密度發酵生產的重點。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供一種能提高巨大芽孢桿菌菌體密度的方法，使其在弱酸環境下獲得高密度。

為實驗上述技術目的，本發明所提出的技術方案為在培養的過程中，培養基pH＜6.8時，發酵罐自動向培養基中加入添加濃度為3g/L的碳酸氫銨，pH調節至7.0-7.3。

其中，本發明中的芽孢桿菌是從養殖土壤中提取的芽孢桿菌，為巨大芽孢桿菌Bacillus megatherium，于2016年12月5日保藏于中國科學院微生物研究所，保藏號為CGMCC No.13418，保藏地址為北京市朝陽區北辰西路1號院3號。

所述培養基配方為：玉米漿干粉3.0±0.2％、糖蜜5.0±0.5％、CaCl₂0.06±0.01％、K₂HPO₄ 0.25±0.05％；余量為水，pH調節至7.0-7.3。

微生物活菌的測定方法：參照國標20287-2006農用微生物菌劑。

有益效果：本發明提供的在培養基中添加碳酸氫銨后巨大芽孢桿菌在pH≥6.8條件下，比對照組(未添加碳酸氫銨)具有更好的生長性能。本發明提供的方法，對操作人員專業素質要求低，簡單易行。

具體實施例

下面通過具體的實施例詳細說明本發明。

實施例1

巨大芽孢桿菌在生長過程中能夠產生具有分解有機磷、無機磷的有機酸，即酸解作用。將該菌株用于肥料行業，具有增加難溶性磷的利用率，提高肥效，促進作物生長的功效，是低投入高產出的可持續發展。本發明的芽孢桿菌是從養殖土壤中提取的芽孢桿菌，為巨大芽孢桿菌Bacillus megatherium，于2016年12月5日保藏于中國科學院微生物研究所，保藏地址為北京市朝陽區北辰西路1號院3號，保藏號為CGMCC No.13418，本發明中的芽孢桿菌產酸能力比一般芽孢桿菌偏強，經16S rDNA比對，與巨大芽胞桿菌的序列同源性為99％。經LIOLOG4.20微生物自動鑒定系統鑒定，該菌株與巨大芽孢桿菌(Bacillus megatherium)符合。

實施例2添加碳酸氫鈉提高微生物含菌量。

培養基配方為：玉米漿干粉3.0％、糖蜜5.0％、CaCl₂0.06％、K₂HPO₄ 0.25％，余量為水，pH調節至7.0。

對照組：將砂土管保藏的巨大芽孢桿菌接入固體培養基，在37℃靜置培養至對數中后期，以5％的接種量將種子轉入發酵培養基，在初始培養條件pH＝7.0的情況下，于37℃、250rpm條件下培養20h時，pH降至6.0，32h發酵結束后微生物活菌含量為4.0×10⁸g/L。

添加組：將砂土管保藏的巨大芽孢桿菌接入固體培養基，在37℃靜置培養至對數中后期，以5％的接種量將種子轉入發酵培養基，初始培養條件pH＝7.0，在培養的過程中，培養基pH＜6.8時，發酵罐自動向培養基中加入添加濃度為3g/L的碳酸氫銨，調節pH值至7.3。于37℃、250rpm條件下培養，28h發酵結束后，微生物活菌含量為6.3×10⁸g/L，縮短發酵對數生長期4h。

與對照組相比，不同的是添加組在培養的過程中，培養基pH＜6.8時，發酵罐自動向培養基中加入添加濃度為3g/L的碳酸氫銨，調節pH值至7.3。

發酵結束后測定微生物活菌含量及終止pH，結果如表1所示。

表1微生物活菌含量及終止pH測定

結論：菌株Bacillus Megatherium的最終活菌含量比對照組(未添加)提高了57.5％；終止pH也提高至7.8，縮短發酵對數生長期4h，抗酸能力顯著提高。

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