[發明專利]食源性致病菌可視化檢測探針及可視化檢測方法

在審

• 申請號: 201710600610.9
• 申請日: 2017-07-21
• 公開（公告）號: CN107177697A
• 公開（公告）日: 2017-09-19
• 發明（設計）人: 張恒;張虹;趙現峰;牛娜;劉惠玲;涂曉波;黃欣迪
• 申請（專利權）人: 深圳出入境檢驗檢疫局食品檢驗檢疫技術中心
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/04;C12N15/11
• 代理公司: 深圳市翼智博知識產權事務所(普通合伙)44320
• 代理人: 肖偉

1. 一種食源性致病菌可視化檢測探針，其特征在于：包括：

在預先選定的作為目標菌候選檢測位點的基因的第一區域設計及合成的SmartAmp引物探針，所述SmartAmp引物探針的5’端引入有第一活性基團并通過所述第一活性基團連接金納米粒子以及預先確定的與所述目標菌相對應的熒光粒子；以及

在預先選定的作為目標菌候選檢測位點的基因的第二區域設計及合成的熒光編碼納米探針，所述熒光編碼納米探針的5’端引入有第二活性基團并通過所述第二活性基團連接金納米粒子以及預先確定的與所述目標菌相對應的熒光納米粒子。

2.根據權利要求1所述的食源性致病菌可視化檢測探針，其特征在于：在所述候選檢測位點的基因的第二區域設計有多個熒光編碼納米探針結合位點，在每一個結合位點均設計及合成一個熒光編碼納米探針而構成多位點熒光編碼納米探針。

3.根據權利要求1所述的食源性致病菌可視化檢測探針，其特征在于：所述第一活性基團和第二活性基團選自如下基團：氨基、巰基或羧基。

4.根據權利要求2所述的食源性致病菌可視化檢測探針，其特征在于：所述多位點熒光編碼納米探針的堿基數為10-30個。

5.根據權利要求1所述的食源性致病菌可視化檢測探針，其特征在于：所述熒光納米粒子采用稀土熒光納米粒子。

6.一種食源性致病菌可視化檢測方法，其特征在于：包括：

預先選定作為目標菌的食源性致病菌的候選檢測位點的基因；

在所述候選檢測位點的基因的第一區域和第二區域分別設計及合成SmartAmp引物探針和熒光編碼納米探針獲得可視化檢測探針，所述SmartAmp引物探針的5’端借助于第一活性基團連接金納米粒子以及預先確定的與所述目標菌相對應的熒光納米粒子，所述熒光編碼納米探針的5’端借助于第二活性基團連接有金納米粒子以及預先確定的與所述目標菌相對應的熒光納米粒子；

利用可視化檢測探針對待檢樣品進行SmartAmp擴增，然后在紫外燈照射下進行觀察，根據觀察到的熒光信號，確定所述待檢樣品中是否含有所述食源性致病菌；

在進行擴增后未能檢測出含有食源性致病菌時，進一步利用可視化檢測探針與待檢樣品進行雜交，然后再次在紫外燈照射下進行觀察，根據觀察到的熒光信號，確定所述待檢樣品中是否含有所述食源性致病菌。

7.根據權利要求6所述的食源性致病菌可視化檢測方法，其特征在于：在所述候選檢測位點的基因的第二區域設計有多個熒光編碼納米探針結合位點，在每一個結合位點均設計及合成一個熒光編碼納米探針而構成多位點熒光編碼納米探針。

8.根據權利要求6所述的食源性致病菌可視化檢測方法，其特征在于：所述第一活性基團和第二活性基團選自如下基團：氨基、巰基或羧基。

9.根據權利要求7所述的食源性致病菌可視化檢測方法，其特征在于：所述多位點熒光編碼納米探針的堿基數為10-30個。

10.根據權利要求6所述的食源性致病菌可視化檢測方法，其特征在于：所述熒光納米粒子采用稀土熒光納米粒子。