[發明專利]一種蛻膜和絨毛配對組織芯片、制備方法及其應用

有效

• 申請號: 201710598366.7
• 申請日: 2017-07-21
• 公開（公告）號: CN107192594B
• 公開（公告）日: 2019-11-05
• 發明（設計）人: 鮑時華;王柳柳;朱丹
• 申請（專利權）人: 上海市第一婦嬰保健院
• 主分類號: G01N1/28
• 分類號: G01N1/28;G01N1/36
• 代理公司: 上海卓陽知識產權代理事務所(普通合伙) 31262
• 代理人: 周春洪

本發明涉及生物技術領域，具體涉及一種蛻膜和絨毛配對組織芯片、制備方法及其應用。本發明將正常妊娠或病理妊娠患者的蛻膜和絨毛標本設置在組織芯片點樣孔中，制成成組織芯片，使源自同一病例標本的蛻膜和絨毛組織形成配對，實現生理結構上的母?胎界面在組織芯片上的功能呈現。其優點表現在：1)高通量，一次即獲大量信息，成百上千倍地提高效率；2)并行化，可比性強、準確性高；3)實驗誤差小，實驗條件保持一致；4)便于設置各種實驗對照，且大量縮減研究費用。本發明可用于病理妊娠病因篩查及分子分型、新型標志物篩選與驗證、個體化治療患者篩選以及療效和預后判斷等，對于正常妊娠維持機制和病理妊娠發病機制的研究具有重要意義。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體地說，是一種蛻膜和絨毛配對組織芯片、制備方法及其應用。

背景技術

生物芯片是指包被在硅片、尼龍膜等固相支持物上的高密度組織、細胞、蛋白質、核酸、糖類以及其他生物組分的高通量微陣列。利用高通量生物芯片，通過特異性分子雜交及染色技術，對受檢樣本進行檢測，可準確、快速獲取大量的分子檢測信息。目前已廣泛應用于生命科學研究、臨床醫學分子診斷、以及生物抗體靶向藥物篩查和驗證等領域。組織芯片技術可將成百上千不同個體、不同來源的臨床組織標本根據研究的目的，按預先設計的順序集成在一張固相載體上進行分析。研究者可在相同的條件下對大量正?；蚣膊?，以及疾病發展不同階段的病理生理狀態下的組織樣本中的某一個或多個特定的基因、蛋白質或與其相關的表達產物進行平行分析研究。組織芯片的制作有手工制作和機械制作兩種，其基本流程包括：建立高質量的組織樣本庫、設計并擬定組織芯片、核對組織相關疾病的病理診斷、組織定位、陣列蠟塊的制作、組織芯片切片等。在組織芯片制作過程中，受體蠟塊的石蠟質量對于構建一個完整的組織芯片具有極其重要作用。構建熔點、硬度和柔韌性等物理特性能達到最佳狀態的受體石蠟是制備優質組織芯片的必要條件和基礎。組織芯片受體蠟塊的軟硬度應當與供體組織芯相似，現有技術受體蠟塊的軟硬度是通過在石蠟溶液中加入蜂蠟來調節硬度，本發明在制備蛻膜組織芯的過程中，加入蜂蠟后仍然存在裂痕現象，組織芯染色后仍有掉片情況。因此針對不同組織芯的特點，提供與組織芯匹配的受體蠟塊，提高組織芯與受體蠟塊的相容性，避免組織芯片制作過程中掉片，提高組織芯片利用效率，是高質量組織芯片的制備基礎。

正常妊娠是一個復雜的生理過程，胎兒雖攜有遺傳自父系的HLA抗原，但卻并未引發母體產生針對胎兒這種特殊半同種“天然移植物”的排斥。妊娠期母-胎間存在著復雜的分子對話機制，以維持胎兒胎盤正常發育。妊娠早期胎兒絨毛外滋養細胞(EVT)侵入蛻膜組織，與母體蛻膜免疫細胞(DIC)及蛻膜基質細胞(DSC)直接接觸，形成精細調控的母-胎界面。母-胎界面主要由3種細胞構成：胚胎來源的滋養細胞(trophoblast,Tro)，母體來源的蛻膜基質細胞(decidual stromal cell,DSC)和蛻膜免疫細胞(decicidual immune cell,DIC)。作為母-胎界面唯一攜帶有父系抗原的滋養細胞，其侵襲與遷移是胚泡著床、胎盤發育，并建立母-胎關系的關鍵步驟。蛻膜基質細胞除參與蛻膜營養供應之外，還分泌多種活性分子調節胚泡著床與胎盤發育，并作為免疫潛能細胞，參與抗原提呈和分泌細胞因子，發揮重要的免疫調節作用。蛻膜免疫細胞是母-胎免疫耐受的基礎，通過表達特殊的活化標記和分泌大量的細胞因子，在母-胎界面局部發揮著不同于外周的免疫調節作用。正常生理妊娠時母-胎界面呈現Th2型免疫優勢和調節性T細胞(regulatory T cells,Treg)擴增現象，一旦這種耐受狀態被打破，Th1型免疫反應占優勢，將導致妊娠失敗或妊娠并發癥如復發性流產、子癇前期等。對母－胎界面形成的深入研究是揭示正常妊娠維持機制和病理妊娠發病機制的重要途徑和手段，因此針對蛻膜和絨毛的特點，提供一種蛻膜和絨毛配對組織芯片及其制備方法，對母-胎界面形成、病理妊娠病因篩查、新型標志物篩選與驗證、個體化治療患者篩選以及療效和預后判斷具有重要意義，而現有技術中尚未發現利用蛻膜和絨毛組織制備組織芯片的技術及應用的報道。

發明內容

本發明的第一個目的是針對現有技術中的不足，提供一種蛻膜和絨毛配對組織芯片。