[發明專利]一種同時測定扎沖十三味丸中烏頭堿及其降解產物的方法

在審

• 申請號: 201710593649.2
• 申請日: 2017-07-14
• 公開（公告）號: CN107796905A
• 公開（公告）日: 2018-03-13
• 發明（設計）人: 佘宜寰;上官同強;齊平;宋華先;韓風雨;于秀玲;孔新穎
• 申請（專利權）人: 赤峰陸爾草中蒙藥科技有限公司;內蒙古天奇中蒙制藥股份有限公司;內蒙古博奧蒙中藥工程研究院有限公司
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于蒙藥化學成分分析領域，具體涉及一種HPLC-MS法同時測定扎沖十三味丸中烏頭堿及其降解產物的方法。

背景技術

扎沖十三味丸是蒙醫臨床最常用的傳統方劑之一，又名嘎日迪十三扎沖十三味丸，它主要由訶子、石菖蒲、木香、沉香、制草烏等十三種中藥成分組成，在臨床中該藥主要用于半身不遂、左右癱瘓、口歪眼斜、四肢麻木、風濕、關節疼痛等。臨床研究表明，扎沖十三味丸對血腫有明顯的促進吸收、改善腦血液循環、清除氧自由基、抑制血小板聚集、保護心肌缺血和增加腦血流量等作用。訶子為處方中的君藥，具有澀腸止瀉，斂肺止咳，降火利咽等功效(包那欽，阿古拉，王蘭英.扎沖十三味丸對心腦血管疾病的治療效果[J].中國民族醫藥雜志，2005，11(6)：9-10.)。沒食子酸為扎沖十三味丸中主要有效成分之一，沒食子酸(Gallicacid，GA)，是一種廣泛存在于水果和中草藥等植物中的天然酚酸類化合物，它具有較強的抗氧化性，具有抗菌、抗病毒和抗腫瘤作用(付煜榮，張萬明，陳桂敏.景天三七中沒食子酸和總酚酸含量測定[J].中藥，2006，28(7)：1016-1018.)。

草烏是蒙藥常用的藥材，并在蒙醫很多經典著作中都有記載。據統計，在《蒙醫金匱》、《甘露四部》、《中國醫學百科全書·蒙醫學》、《蒙醫方劑學》、《內蒙古蒙成藥標準》所記載的蒙藥方劑中含草烏方劑達到11.27％。蒙醫學認為，草烏具有殺“粘”，止痛，燥“協日烏素”的功效。但草烏屬于烏頭類中藥材，含有烏頭堿型生物堿。現代藥理學實驗表明，烏頭堿型生物堿具有抗炎作用、鎮痛作用、調節免疫作用、擴張冠狀血管的作用等。但是，烏頭堿具有強毒性，口服3～4mg即可致人死亡。通過水解炮制，可以使極毒的烏頭堿C8位上的乙酰基水解，失去一分子醋酸，得到相應的苯甲酰烏頭原堿，其毒性可降低至雙酯型烏頭堿的1/50～1/100，若再進一步將C14位上的苯甲酰基水解，失去一分子的苯甲酸，得到的親水性氨基醇類烏頭原堿，其毒性僅為雙酯型烏頭堿的1/2000～1/4000，這種水解炮制方法可以大大降低烏頭堿的毒性。

烏頭堿的水解過程復雜，水解途徑不明確，水解產物眾多。魏巍等將烏頭堿加熱水解，分離得到了新的水解產物焦烏頭堿(魏巍，烏頭堿水解產物的研究)。譚鵬等發現了烏頭原堿進一步的水解產物-脫水烏頭原堿。

現有技術中僅僅報道了草烏藥材中的烏頭堿檢測方法以及可能的降解產物，其方法并不能用于扎沖十三味丸中烏頭堿及其類似物的檢測(有干擾)，也無法預測扎沖十三味丸劑中含有哪些烏頭堿類似物。為了保證扎沖十三味丸的安全性，有必要發明一種同時檢測該制劑中烏頭堿及其降解產物的方法。

發明內容

本發明的技術方案在于，提供一種同時測定扎沖十三味丸中烏頭堿及其降解產物的方法。

(1)供試品溶液的制備：

取本品適量，研細，取20g，精密稱定，加氨試液15ml潤濕，加乙醚-氯仿混合溶液(體積比1∶1)30ml，搖勻，放置24小時，濾過，取濾液上大孔吸附樹脂柱，分別用水溶液和氨水洗脫，棄去洗脫液，然后用乙醇水溶液洗脫，收集洗脫液，洗脫液濃縮至干，用二氯甲烷溶解，即得。

所述的大孔吸附樹脂柱型號為AB-8或D101，優選AB-8型，所述的水溶液和氨水洗脫體積為2-3倍柱體積，氨水pH值為9-10，所述乙醇水溶液體積為3-4倍柱體積，所述乙醇水溶液中乙醇濃度為80％(v/v)，pH為4-5。

(2)色譜條件：

色譜柱：Agilent Zobax Stable Bond C18(4.6mm×250mm，5μm)；流動相：乙腈(A)-氨水溶液(B，pH為8.0)，梯度洗脫，0～20min：20％→60％A；20～40min：60％→80％A；40～60min：80％→60％A；60～80min：60％→20％A；流速：0.5mL/min，柱溫：室溫；檢測波長：240nm，進樣量10μL。

(3)質譜條件：

霧化氣和干燥氣均為氮氣，采集模式為正離子，毛細管壓力為3500ev，霧化溫度為350℃，干燥氣為10.0L/min，霧化壓力為5.8KPa，質譜掃描范圍為m/z為200～800。

本發明的優點是：

現有技術公開HPLC-MS檢測草烏中烏頭堿的方法無法直接應用于檢測扎沖十三味丸中的烏頭堿，原因是該丸劑中還還有其他組分，造成了很大的干擾，為此，我們進行了多方面的改進：