[發明專利]一種鯽魚冠狀病毒TaqMan實時熒光定量RT-PCR檢測引物及應用

有效

• 申請號: 201710588694.9
• 申請日: 2017-07-19
• 公開（公告）號: CN107245533B
• 公開（公告）日: 2018-05-22
• 發明（設計）人: 陳孝宇;曾憲東;鄭劍;徐家文
• 申請（專利權）人: 湖北出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫技術中心
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6851;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所 42001
• 代理人: 龔瑩瑩

本發明屬于病毒檢測領域，具體公開了一種鯽魚冠狀病毒TaqMan實時熒光定量RT?PCR檢測引物和探針及應用，發明人首次從鯽魚中分離出了一種鯽魚冠狀病毒，該病毒為鯽魚冠狀病毒（Crucian Carp Bafinivirus）HB93，針對該病毒序列設計引物和探針：正向引物F：5'?ATCAAACACCCACTCCCAC?3'，反向引物R：5'?AGGTCAGGTGATGTTGCG?3'；熒光探針為P：5'?FAM?TGACCCATTCTTGCACTGCTTCTGT?TAMRA?3'。可對鯽魚冠狀病毒進行定量檢測，該引物的特異性好，靈敏度高。

技術領域

本發明屬于病毒分子檢測技術領域，具體涉及一種鯽魚冠狀病毒TaqMan實時熒光定量RT-PCR檢測引物及應用。

技術背景

國際病毒分類委員會(International Committee on Taxonomy of Viruses,ICTV)于2012年發表了最新的病毒分類第九次報告，將套式病毒目(Nidovirales)中的冠狀病毒科(Coronavi ridea)中新設冠狀病毒亞科(Coronavirinea)和環曲病毒亞科(Torovirinae)。

冠狀病毒科是一類線形單股正鏈RNA病毒，最早于1937年從雞身上分離出來，Almeida等對這些病毒進行了形態學研究，電子顯微鏡觀察發現這些病毒的包膜上有形似日冕的棘突，故提出命名這類病毒為冠狀病毒[1]。1975年，國際病毒命名和分類委員會正式命名了冠狀病毒科。2002-2003年期間，自我國局部地區發生的非典型肺炎，即由冠狀病毒屬的嚴重急性呼吸綜合征病毒(SARS-CoV)引起，世界上有30多個國家和地區相繼報道出現病例，病死率超過10％。2012年，中東地區開始出現新型冠狀病毒，病死率超過50％，引起了世界范圍的廣泛關注，造成社會對冠狀病毒的恐慌。因此，對冠狀病毒進行深入研究具有重要意義。

目前對冠狀病毒科的研究主要集中在冠狀病毒亞科，而對環曲病毒亞科研究甚少。其中，2006年鳊魚病毒屬(Bafinivirus)的中的鳊魚病毒(White bream virus)由Schütze H等科學家在鳊魚體內發現，這也是目前ICTV分類中確定的唯一以水生動物為宿主的冠狀病毒。

目前鯽魚冠狀病毒(Crucian Carp Bafinivirus,CCBV)尚無公開報道，更也無有效的檢測方法。

發明內容

本發明的目的在于提供一種鯽魚冠狀病毒HB93TaqMan實時熒光定量RT-PCR檢測引物，所述的引物如下：

正向引物F：5'-ATCAAACACCCACTCCCAC-3'，反向引物R：5'-AGGTCAGGTGATG TTGCG-3'；熒光探針P：5'-FAM-TGACCCATTCTTGCACTGCTTCTGT-TAMRA-3'。

本發明的目的在于提供一種鯽魚冠狀病毒HB93TaqMan實時熒光定量RT-PCR檢測引物的應用，包括利用所述的應用制備成鯽魚冠狀病毒檢測試劑盒。

本發明的最后一個目的在于提供了一種鯽魚冠狀病毒HB93TaqMan實時熒光定量RT-PCR的陽性對照，所述的陽性對照是將SEQ ID NO.2所示序列插入pGEM-T載體中獲得。為了達到上述目的，本發明采取以下技術措施：

一種鯽魚冠狀病毒HB93TaqMan實時熒光定量RT-PCR檢測引物，所述的引物如下：正向引物F：5'-ATCAAACACCCACTCCCAC-3'，反向引物R：5'-AGGTCAGGTGATGTTG CG-3'；熒光探針P：5'-FAM-TGACCCATTCTTGCACTGCTTCTGT-TAMRA-3'。

一種鯽魚冠狀病毒HB93TaqMan實時熒光定量RT-PCR檢測引物的應用，包括利用上述引物制備成用于檢測鯽魚冠狀病毒檢測試劑盒，或直接用于鯽魚冠狀病毒的檢測。