[發(fā)明專利]一種基于CD117的嵌合抗原受體及其應(yīng)用

有效

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• 申請日: 2017-07-18
• 公開（公告）號: CN107400168B
• 公開（公告）日: 2020-02-07
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 桂思倩;劉昱辰
• 申請（專利權(quán)）人: 深圳市免疫基因治療研究院
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N15/867;A61K35/17;A61P35/00;A61P35/02
• 代理公司: 11332 北京品源專利代理有限公司
• 代理人: 鞏克棟

本發(fā)明涉及一種基于CD117的嵌合抗原受體及其應(yīng)用，具體為以腫瘤特異靶點CD117為基礎(chǔ)的嵌合抗原受體T(CAR?T)細胞技術(shù)的構(gòu)建方法及其在抗腫瘤治療中的應(yīng)用，所述嵌合抗原受體包括抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域、跨膜結(jié)構(gòu)域、共刺激信號傳導(dǎo)區(qū)和CD3ζ信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域串聯(lián)而成；其中，所述抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域結(jié)合腫瘤表面抗原，所述腫瘤表面抗原為CD117。本發(fā)明的嵌合抗原受體通過對CD117腫瘤表面抗原進行特定的基因改造，改造后的抗體能夠使抗原?抗體結(jié)合力更強，不容易發(fā)生突變，且相比于其他嵌合抗原受體和其他腫瘤抗原有更好的效果，靶點的表達量高，使得CAR?T細胞的免疫效果增強，增強了CAR?T細胞的治療效果。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及腫瘤的細胞免疫治療領(lǐng)域，尤其涉及一種基于CD117的嵌合抗原受體及其應(yīng)用，具體為以腫瘤特異靶點CD117為基礎(chǔ)的嵌合抗原受體T(CAR-T)細胞技術(shù)的構(gòu)建方法及其在抗腫瘤治療中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

隨著腫瘤免疫學(xué)理論和臨床技術(shù)的發(fā)展，嵌合抗原受體T細胞療法(Chimericantigen receptor T-cell immunotherapy，CAR-T)成為目前最有發(fā)展前景的腫瘤免疫療法之一。一般，嵌合抗原受體CAR由一個腫瘤相關(guān)抗原結(jié)合區(qū)、胞外鉸鏈區(qū)、跨膜區(qū)域以及胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)區(qū)組成。通常，CAR包含抗體的單鏈片段可變(Single chain fragmentvariable，scFv)區(qū)或?qū)δ[瘤相關(guān)抗原(tumor associated antigen,TAA)具有特異性的結(jié)合結(jié)構(gòu)域，其通過鉸鏈和跨膜區(qū)與T細胞信號傳導(dǎo)分子的胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域偶聯(lián)。最常見的淋巴細胞活化部分包括與T細胞效應(yīng)物功能觸發(fā)(例如CD3ζ)部分串聯(lián)的T細胞共刺激結(jié)構(gòu)域。CAR介導(dǎo)的過繼性免疫療法允許CAR-移植的T細胞以非HLA限制性方式直接識別靶腫瘤細胞上的TAA。

大多數(shù)患有B細胞惡性腫瘤(包括B細胞急性淋巴細胞性白血病(B cell acutelymphocytic leukemia,leukemia,B-ALL)和慢性淋巴細胞性白血病(chroniclymphocytic leukemia,CLL))的患者將由于其疾病而死亡。治療這些患者的一種方法是通過CAR的表達，對T細胞進行遺傳修飾以靶向在腫瘤細胞上表達的抗原。CAR是經(jīng)設(shè)計以人白細胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)非依賴性方式識別細胞表面抗原的抗原受體。嘗試使用表達CAR的遺傳修飾細胞來治療這些類型的患者已經(jīng)取得了有前景的成功。

CD19分子是治療B淋巴細胞系腫瘤潛在的靶點，也是CAR研究中的熱點，CD19的表達局限于正常和惡性B細胞，是廣泛接受的用來安全測試的CAR靶標(biāo)。靶向CD19分子的嵌合抗原受體基因修飾的T細胞(CD19CAR-T)在治療多發(fā)性、難治性的急性B淋巴細胞白血病上取得巨大成功，而在難治性、復(fù)發(fā)性慢性B淋巴細胞白血病和B淋巴細胞系淋巴瘤的治療中療效明顯較差。

CN 104788573A公開了了一種嵌合抗原受體hCD19scFv-CD8α-CD28-CD3ζ及其用途，該嵌合抗原受體由抗人CD19單克隆抗體HI19a輕鏈和重鏈可變區(qū)(hCD19scFv)、人CD8α鉸鏈區(qū)、人CD28跨膜區(qū)和胞內(nèi)區(qū)、以及人CD3ζ胞內(nèi)區(qū)結(jié)構(gòu)串聯(lián)構(gòu)成，該專利中的CD19在進行一次CAR-T細胞回輸后，CD19的表達量會降低，容易逃過免疫機制。

因此，制備一種嵌合抗原受體能夠解決CD19存在的易突變和表達量降低的問題顯得尤為重要。

發(fā)明內(nèi)容

針對目前CAR-T技術(shù)治療腫瘤中靶向不十分理想，以及腫瘤微環(huán)境影響CAR-T技術(shù)治療效果的情況，本發(fā)明提供一種基于CD117的嵌合抗原受體及其應(yīng)用，本發(fā)明制備的嵌合抗原受體通過將CD117靶點進行基因改造，從而提高了靶點的免疫效果，增強了CAR-T細胞的治療效果。

為達此目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：