[發明專利]PLC圍手術期肝移植患者環狀RNA差異性表達譜圖譜模型及其構建方法和構建系統

在審

• 申請號: 201710576979.0
• 申請日: 2017-07-14
• 公開（公告）號: CN109504750A
• 公開（公告）日: 2019-03-22
• 發明（設計）人: 戴勇;眭維國;吳炎;杜冬;甘晴;曾君
• 申請（專利權）人: 戴勇;眭維國;甘晴;吳炎
• 主分類號: C12Q1/686
• 分類號: C12Q1/686;C40B50/06
• 代理公司: 廣州華進聯合專利商標代理有限公司 44224
• 代理人: 何平

1.一種PLC圍手術期肝移植患者環狀RNA差異性表達譜圖譜模型的構建方法，其特征在于，包括如下步驟：

設置疾病組與對照組，每組包括若干份相異人體的已經脫離人體的外周血標本；

分別提取各所述外周血標本中的RNA，得到RNA溶液；

采用circRNA微陣列芯片分析疾病組和對照組RNA溶液中的circRNA表達譜，得到circRNA差異數據；

采用RT-PCR驗證疾病組和對照組中circRNA的表達情況，得到對比數據；

對circRNA差異數據及對比數據進行數據分析，構建PLC圍手術期肝移植患者環狀RNA差異性表達譜圖譜模型。

2.根據權利要求1所述的構建方法，其特征在于，分別提取各所述外周血標本中的RNA，得到RNA溶液，具體為：

各取2ml外周血標本，加入1mL TRIzol，用移液管反復吹打多次，得到第一樣品；

將第一樣品于15℃～30℃放置5min后，加入0.2mL的氯仿，震蕩15s后，15℃～30℃孵育2min～3min；

4℃，12,000g離心15min，吸取上層水相；

將水相轉移到新離心管中，加入異丙醇，混勻后15℃～30℃孵育10min，得到第二樣品，其中，異丙醇的加入量為制備第一樣品時加入Trizol試劑量的1/2；

將第二樣品于4℃，12,000g離心10min，使RNA形成RNA沉淀，棄上清；

加入75％乙醇，振蕩混勻后，4℃，7500g離心5min，棄上清；

將RNA沉淀干燥；

加入無RNA酶的水溶解RNA沉淀，55℃～60℃孵育10min，得到總RNA溶液。

3.根據權利要求1所述的構建方法，其特征在于，分別提取各所述外周血標本中的RNA，得到RNA溶液，具體為：

將外周血標本使用淋巴分離液分離出單個核細胞；

向單個核細胞沉淀中加入TRIzol，用移液管反復吹打多次，得到第一樣品；

將第一樣品于15℃～30℃放置5min后，加入0.2mL的氯仿，震蕩15s后，15℃～30℃孵育2min～3min；

4℃下12,000g離心15min，吸取上層水相；

將水相轉移到新離心管中，加入異丙醇，混勻后15℃～30℃孵育10min，得到第二樣品，其中，異丙醇的加入量為制備第一樣品時加入Trizol試劑量的1/2；

將第二樣品于4℃，12,000g離心10min，使RNA形成RNA沉淀，棄上清；

加入75％乙醇，振蕩混勻后，4℃，7500g離心5min，棄上清；

將RNA沉淀干燥；

加入無RNA酶的水溶解RNA沉淀，55℃～60℃孵育10min，得到總RNA溶液。

4.根據權利要求1所述的構建方法，其特征在于，在分別提取各所述外周血標本中的RNA，得到RNA溶液之后，以及在采用circRNA微陣列芯片分析疾病組和對照組RNA溶液中的circRNA表達譜，得到circRNA差異數據之前，所述構建方法還包括如下步驟：

對總RNA進行純化，并測定總RNA中RNA含量。

5.根據權利要求4所述的構建方法，其特征在于，在對總RNA進行純化，并測定總RNA中RNA含量之后，以及在采用circRNA微陣列芯片分析疾病組和對照組RNA溶液中的circRNA表達譜，得到circRNA差異數據之前，所述構建方法還包括如下步驟：

檢測純化后的總RNA是否合格，是則執行后續步驟，其中，總RNA合格的標準為OD260/OD280比值應為1.8～2.1，且OD260/OD230比值要大于1.8。