[發明專利]一種快速和高效質檢文庫的引物序列組及方法有效
| 申請號： | 201710575320.3 | 申請日： | 2017-07-14 |
| 公開（公告）號： | CN107217102B | 公開（公告）日： | 2018-09-28 |
| 發明（設計）人： | 余越美;王瑞超;李海偉;屈武斌;蔡萬世 | 申請（專利權）人： | 艾吉泰康生物科技（北京）有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/6869 | 分類號： | C12Q1/6869;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京匯知杰知識產權代理事務所(普通合伙) 11587 | 代理人： | 蔡倫 |
| 地址： | 102206 北京市昌平區北京市中關*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 快速 高效 質檢 文庫 引物 序列 方法 | ||
1.一種快速對文庫進行質控的方法，所述方法包括：
1)通過NGS-Lqc-L1、NGS-Lqc-M1和NGS-Lqc-H1這3對引物對打斷的參照DNA和待測文庫進行Qpcr實驗，檢測每對引物對應于參照DNA和待測文庫的6個ct值ct1-ct6，其中：
Ct1是指NGS-Lqc-L1這對引物對參照DNA進行Qpcr擴增之后的ct值；
Ct4是指NGS-Lqc-L1這對引物對待測文庫進行Qpcr擴增之后的ct值；
Ct2是指NGS-Lqc-M1這對引物對參照DNA進行Qpcr擴增之后的ct值；
Ct5是指NGS-Lqc-M1這對引物對要檢測文庫進行Qpcr擴增之后的ct值；
Ct3是指NGS-Lqc-H1這對引物對參照DNA進行Qpcr擴增之后的ct值；
Ct6是指NGS-Lqc-H1這對引物對要檢測文庫進行Qpcr擴增之后的ct值；
所述NGS-Lqc-L1為SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.4；所述NGS-Lqc-M1為SEQ ID NO.2和SEQID NO.5；所述NGS-Lqc-H1為SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.6；
2)計算M＝低GC擴增倍數/中GC擴增倍數低，N＝高GC擴增倍數/中GC擴增倍數的值，計算公式為M＝2(ct1-ct4)/2(ct2-ct5)，N＝2(ct3-ct6)/2(ct2-ct5)，
3)待測文庫均一性判斷：M值在0.3以上，并且越接近1，表示待測文庫的均一性越好；同時N>1。
2.權利要求1的方法，在3)中，M值在0.37以上。
3.權利要求1的方法，所述參照DNA優選是基因組DNA。
4.權利要求1的方法，打斷的對參照DNA打斷后的片段大小為150bp-200bp。
5.一種快速對文庫進行質控的方法，所述方法包括：
1)通過NGS-Lqc-L1、NGS-Lqc-M1和NGS-Lqc-H1這3對待測文庫進行Qpcr實驗，檢測每對引物對應于待測文庫的3個ct值ct4-ct6，
Ct4是指NGS-Lqc-L1這對引物對待測文庫進行Qpcr擴增之后的ct值；
Ct5是指NGS-Lqc-M1這對引物對要檢測文庫進行Qpcr擴增之后的ct值；
Ct6是指NGS-Lqc-H1這對引物對要檢測文庫進行Qpcr擴增之后的ct值；
所述NGS-Lqc-L1為SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.4；所述NGS-Lqc-M1為SEQ ID NO.2和SEQID NO.5；所述NGS-Lqc-H1為SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.6；
2)計算M＝低GC擴增倍數/中GC擴增倍數低，N＝高GC擴增倍數/中GC擴增倍數的值，計算公式為M＝2(ct1-ct4)/2(ct2-ct5)，N＝2(ct3-ct6)/2(ct2-ct5)，其中Ct1、Ct2和Ct3分別是約21、約21和約18；
3)待測文庫均一性判斷：M值在0.37以上，越接近1，均一性越好；同時N>1。
6.一種快速和高效質檢文庫的引物序列組：
所述引物序列組包括SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.4；SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.5；SEQID NO.3和SEQ ID NO.6。
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