[發明專利]環介導等溫擴增結合側向流動試紙條檢測錦鯉皰疹病毒

在審

• 申請號: 201710569444.0
• 申請日: 2017-07-13
• 公開（公告）號: CN107287351A
• 公開（公告）日: 2017-10-24
• 發明（設計）人: 肖勤;劉露;鐘尉方;徐春霞
• 申請（專利權）人: 河北農業大學
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司11245
• 代理人: 關暢,白艷

1.一種檢測錦鯉皰疹病毒的環介導等溫擴增成套引物，由上游外引物、下游外引物、上游內引物和下游內引物組成；

所述上游外引物的核苷酸序列為序列1；

所述下游外引物的核苷酸序列為序列2；

所述上游內引物的核苷酸序列為序列3；

所述下游內引物的核苷酸序列為序列4。

2.根據權利要求1所述的成套引物，其特征在于：所述上游外引物、所述下游外引物、所述上游內引物和所述下游內引物的摩爾比為1:1:8:8；

或所述上游內引物或所述下游內引物標記生物素。

3.一種檢測錦鯉皰疹病毒的環介導等溫擴增試劑，包括權利要求1或2所述的成套引物、PCR擴增緩沖液和DNA聚合酶；

所述上游外引物和所述下游外引物的濃度均為0.2μmol/L；

所述上游內引物和所述下游內引物的濃度均為1.6μmol/L。

4.一種檢測錦鯉皰疹病毒的試劑，由權利要求1或2所述的成套引物和探針組成；

所述探針的核苷酸序列為序列5，

或所述探針的5'端末端異硫氰酸熒光素FITC標記。

5.一種檢測錦鯉皰疹病毒的試劑盒，包括權利要求1或2所述的成套引物或權利要求3所述的環介導等溫擴增試劑或權利要求4所述的試劑。

6.權利要求1或2所述的成套引物或權利要求3所述的環介導等溫擴增試劑或權利要求4所述的試劑或權利要求5所述的試劑盒在檢測或輔助檢測錦鯉皰疹病毒中的應用；

或，權利要求1或2所述的成套引物或權利要求3所述的環介導等溫擴增試劑或權利要求4所述的試劑或權利要求5所述的試劑盒在制備檢測或輔助檢測錦鯉皰疹病毒產品中的應用；

或權利要求1或2所述的成套引物或權利要求3所述的環介導等溫擴增試劑或權利要求4所述的試劑或權利要求5所述的試劑盒在檢測或輔助檢測待測樣本是否感染錦鯉皰疹病毒中的應用；

或，權利要求1或2所述的成套引物或權利要求3所述的環介導等溫擴增試劑或權利要求4所述的試劑或權利要求5所述的試劑盒在制備檢測或輔助檢測待測樣本是否感染錦鯉皰疹病毒產品中的應用。

7.一種檢測或輔助檢測待測樣本是否感染錦鯉皰疹病毒的方法，包括如下步驟：

1)用權利要求1或2所述的成套引物對待測樣本進行環介導等溫擴增，得到環介導等溫擴增產物；

2)用權利要求4所述的試劑中的所述探針雜交所述環介導等溫擴增產物，得到雜交產物；

3)側向流動試紙條檢測所述雜交產物，若所述試劑條的檢測帶顯色2條，則所述待測樣本感染或候選感染KHV，若所述試劑條的檢測帶顯色1條，則所述待測樣本未感染或候選未感染KHV。

8.一種檢測或輔助檢測待測樣本是否感染錦鯉皰疹病毒的方法，包括如下步驟：

1)用權利要求1或2所述的成套引物對待測樣本進行環介導等溫擴增，得到環介導等溫擴增產物；

2)電泳檢測所述環介導等溫擴增產物，若含有擴增產物，則所述待測樣本感染或候選感染KHV，若不含有所述擴增產物，則所述待測樣本未感染或候選未感染KHV。

9.根據權利要求7或8所述的方法，其特征在于：所述環介導等溫擴增的模板為含有KHV特異基因片段的物質。

10.根據權利要求7-9中任一所述的方法，其特征在于：

所述環介導等溫擴增的條件為63℃水浴45min；

或所述雜交的條件63℃雜交5min。