[發明專利]一種艾塞那肽雜質含量的分析方法

在審

• 申請號: 201710558482.6
• 申請日: 2017-07-11
• 公開（公告）號: CN109239242A
• 公開（公告）日: 2019-01-18
• 發明（設計）人: 代連花;趙慧英;張磊;張林
• 申請（專利權）人: 齊魯制藥有限公司
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06;G01N30/02
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種艾塞那肽雜質含量的分析方法，其步驟包括：采用胰蛋白酶對艾塞那肽及其雜質進行酶解，然后采用色譜法進行分離。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于：所述艾塞那肽雜質為[D-His¹]-艾塞那肽、[Double Pro³⁸]-艾塞那肽或[Des Gly²]-艾塞那肽。

3.如權利要求1-2任一項所述的方法，其特征在于：采用0.05mg/ml胰蛋白酶對艾塞那肽產品雜質[Double Pro³⁸]-艾塞那肽、[Des-Gly²]-艾塞那肽及艾塞那肽樣品特定位點進行酶切水解，并對水解產生的特定酶切肽段用色譜進行分離，并采用外標法準確定量。

4.如權利要求1-3任一項所述的方法，其特征在于：采用冰乙酸或者稀磷酸終止胰蛋白酶酶切反應。

5.如權利要求1-4任一項所述的方法，其特征在于：當雜質為[D-His¹]-艾塞那肽時，色譜分析采用強陽離子交換色譜柱，以磷酸二氫鉀緩沖液-乙腈為流動相。

6.如權利要求1-4任一項所述的方法，其特征在于：當雜質為[Double Pro³⁸]-艾塞那肽或[Des Gly²]-艾塞那肽時，色譜分析采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱，以氯化鉀溶液作為流動相A，以乙腈溶液為流動相B。

7.如權利要求5所述的方法，其特征在于：所述強陽離子交換色譜柱的粒徑為3μm，色譜柱長度為100mm，色譜柱內徑為4.6mm；所述磷酸二氫鉀緩沖液pH值為2.0～6.0，優選為3.8～4.2，更優選為3.9、4.0、4.1；所述磷酸二氫鉀濃度為0.025～0.045mol/L，優選為0.035～0.040mol/L，更優選為0.035mol/L。

8.如權利要求6所述的方法，其特征在于：所述十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱的粒徑為5μm，色譜柱長度為150mm，色譜柱內徑為4.6mm；所述氯化鉀溶液的pH值為2.0～4.0，優選為2.5～2.9，更優選為2.6、2.7、或者2.8；氯化鉀濃度為0.090～0.110mol/L，優選為0.095～0.100mmol/L，更優選為0.10mmol/L。

9.如權利要求5，7任一項所述的方法，其特征在于：色譜分析采用等度洗脫，磷酸二氫鉀緩沖液-乙腈比例為56.4:43.6，流速為1.1ml/min～1.3ml/min；柱溫：45℃～55℃；檢測波長：214nm；進樣體積：40μl。

10.如權利要求6,8任一項所述的方法，其特征在于：色譜分析采用如下梯度洗脫程序：

流速0.9ml/min～1.1ml/min，柱溫40℃～50℃，檢測波長：214nm，進樣體積80μl；優選的，采用如下梯度洗脫程序：

流速0.9ml/min～1.1ml/min，柱溫40℃～50℃，檢測波長：214nm，進樣體積80μl。