[發明專利]一種肝癌檢測試劑盒

在審

• 申請號: 201710557291.8
• 申請日: 2017-07-10
• 公開（公告）號: CN107964563A
• 公開（公告）日: 2018-04-27
• 發明（設計）人: 鄧鑫
• 申請（專利權）人: 廣西中醫藥大學附屬瑞康醫院（廣西中西醫結合醫院）
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;G01N33/574
• 代理公司: 北京天盾知識產權代理有限公司11421
• 代理人: 易曉鈺

技術領域

本發明涉及一種肝癌檢測試劑盒。

背景技術

肝臟是人的主要消化器官，因不注意飲食衛生，它容易導致各種疾病，如各種肝炎、肝腹水、肝硬化等，特別是肝癌，對人類的危害更大，很多時候人體并沒有覺察，沒有疼痛感，當感覺到疼痛時已經進入了肝癌的晚期很難治療，給病人帶來很大的痛苦。

原發性肝癌(Hepatocellularcarcinoma，HCC)是嚴重威脅人類生命健康的疾病。肝細胞癌惡性程度高，容易復發和轉移，預后差，而且早期診斷較困難，往往延誤了最佳治療時期。我國是肝癌高發國家，每年約11萬人死于肝癌，占全世界肝癌死亡人數的45％。發病率和死亡率呈現上升趨勢，且發病年齡構成年輕化，每年用于肝癌治療的醫療支出大為增加，肝癌嚴重危害我國人民生命財產安全，并且是影響社會經濟發展的一個重要因素。

癌癥的早期診斷對其成功治愈有重要的作用。容易獲得并且穩定的生物學標記能夠提供一系列相關的有價值的腫瘤生物學信息。甲胎蛋白(AFP)是目前肝癌(HCC)診斷的主要血清學指標，但是甲胎蛋白檢測的敏感性和特異性仍不高，假陽性率較高，因為人們對癌癥的恐懼心理，假陽性的檢測結果容易給患者造成巨大的精神壓力和財產損失。現有技術中，蛋白的檢測通常采用抗體的方法，由于抗體制備復雜，成本較高，在檢測中并不適合廉價的推廣。

發明內容

本發明的目的在于提供一種肝癌檢測試劑盒，以解決上述背景技術中提出的問題。

為實現上述目的，本發明提供如下技術方案：

一種肝癌檢測試劑盒，包括有cel-miR-39序列，以及用于cel-miR-39、hsa-miR-10a-5p、hsa-miR-455-5p、hsa-miR-30b-5p、hsa-miR-99a-5p、hsa-miR-1271-5p、hsa-miR-136-3p、hsa-miR-3158-3p、hsa-let-7f-5p、hsa-miR-16-5p、hsa-miR-432-5p、hsa-miR-4446-3p和hsa-miR-486-3p實時定量PCR的引物，還包括有反轉錄試劑及實時定量PCR試劑，還包括含有能特異性檢測RAI16蛋白的核酸適體，且核酸適體序列如SEQ ID NO.1-23任一條序列所示，或者在該序列的基礎上進行的一個或幾個核苷酸的替換，并保留其活性，還包括有加了草酸鈉抗凝劑的真空采血管和真空采血針組件。

作為本發明進一步的方案：所述反轉錄試劑為TAKARA 6210A試劑盒。

作為本發明進一步的方案：所述實時定量PCR試劑為DyNAmoSYBR Green qPCR。

與現有技術相比，本發明的有益效果是：利用本發明的核酸適體，可以捕獲血液中的RAI16，從而用于肝癌篩查，部分代替單克隆抗體捕獲RAI16進行檢測，具有高靈敏、成本低、易制備、易保存的優點；采用的miRNA均為現有報道已經發現的miRNA，其測序所用接頭和擴增引物均有成熟的市售商品，可以方便的從市場上獲得，試劑盒易于制備。

具體實施方式

下面將結合本發明實施例中的附圖，對本發明實施例中的技術方案進行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實施例僅僅是本發明一部分實施例，而不是全部的實施例。基于本發明中的實施例，本領域普通技術人員在沒有做出創造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都屬于本發明保護的范圍。

[實施例一]

1.蛋白的制備

根據已有的維甲酸誘導蛋白RAI16的序列NP_073586.5，獲得相應的基因序列，利用CN1318594C中實施例1的真核表達蛋白的方法，進行蛋白的表達，采用常規的蛋白純化方法得到純化的蛋白，濃度為100mg/ml，4度儲存備用。

2.適配體的制備

設計兩端包含大約20個核苷酸、中間包括35個核苷酸的隨機核酸文庫如下：‘5-TGCAAGCAGTGACGAAGATC(N35)GGACAGTTGAAAGTTGACGA-3’；N35代表35個隨機核苷酸。