[發(fā)明專利]一種基于體液中細(xì)胞源性囊泡的多功能載體及制備方法和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710556332.1
• 申請(qǐng)日: 2017-07-10
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107375234B
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-03-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳剛;張偉;龐代文;夏厚福;任建崗;余自力;楊解綱;趙怡芳
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 武漢大學(xué)
• 主分類號(hào): A61K9/50
• 分類號(hào): A61K9/50;A61K31/704;A61K45/00;A61K47/46;A61K48/00;A61K49/00;A61P35/00
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務(wù)所 42001
• 代理人: 王敏鋒

本發(fā)明公開(kāi)了一種基于體液中細(xì)胞源性囊泡的多功能載體及制備方法和應(yīng)用，步驟是：（1）收集人的體液，經(jīng)梯度超速離心，棄上清，用無(wú)菌PBS重懸沉淀；（2）將體液來(lái)源細(xì)胞源性膜性囊泡、超小粒徑發(fā)光材料和電穿孔緩沖液加入到電擊杯中混勻，置于電穿孔儀上處理，電穿孔結(jié)束后室溫放置修復(fù)，經(jīng)超速離心后用PBS重懸沉淀，獲取基于體液來(lái)源細(xì)胞源性膜性囊泡并經(jīng)超小粒徑發(fā)光材料標(biāo)記的多功能載體。該載體在制備治療或預(yù)防腫瘤的化療藥物或基因治療藥物中應(yīng)用，具備良好的生物相容性，方便載入多種治療藥物，有效抑制腫瘤生長(zhǎng)，適用于多種良、惡性腫瘤的診療，尤其為顱內(nèi)、胸腔內(nèi)和腹腔內(nèi)深部腫瘤的診療提供了選擇。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物與醫(yī)藥新劑型、制劑技術(shù)領(lǐng)域，更具體涉及一種基于體液中細(xì)胞源性膜性囊泡的多功能載體，該載體具備良好的生物相容性，優(yōu)越且穩(wěn)定持久的活體熒光成像能力和磁共振成像能力，高效的藥物荷載和安全的腫瘤靶向遞送能力；更具體涉及一種基于體液中細(xì)胞源性膜性囊泡的多功能載體的制備方法，該方法簡(jiǎn)潔高效，產(chǎn)出率高，產(chǎn)物質(zhì)量均一穩(wěn)定；還涉及一種基于體液中細(xì)胞源性膜性囊泡的多功能載體的用途，利用該基于體液中細(xì)胞源性膜性囊泡的多功能載體實(shí)現(xiàn)治療基因片段或化療藥物的特異性靶向輸送，用以預(yù)防或治療諸如口腔癌、宮頸癌、脈管畸形等多種良、惡性疾病。

背景技術(shù)

細(xì)胞源性膜性囊泡，又被稱為細(xì)胞外囊泡(Extracellular Vesicles,EVs)，是指從細(xì)胞膜上脫落或者由細(xì)胞分泌的具有雙層膜結(jié)構(gòu)的囊泡狀小體，直徑小于1000nm。細(xì)胞源性膜性囊泡主要由細(xì)胞源性微粒(Microparticles,MPs)和外泌體(Exosomes,EXOs)組成。其中，細(xì)胞源性微粒是細(xì)胞激活、損傷或凋亡后從細(xì)胞膜脫落的小囊泡，直徑約為100～1000nm；外泌體由細(xì)胞內(nèi)的多泡小體(multivesicular bodies,MVB)與細(xì)胞膜融合后以外分泌的形式釋放到細(xì)胞外，直徑約為40～100nm。細(xì)胞源性膜性囊泡廣泛存在于細(xì)胞培養(yǎng)上清以及各種體液(血液、淋巴液、唾液、尿液、精液、乳汁)中，攜帶有細(xì)胞來(lái)源相關(guān)的多種蛋白質(zhì)、脂類、DNA、mRNA、miRNA等，在許多生理病理學(xué)過(guò)程中充當(dāng)細(xì)胞間信息傳遞載體，參與細(xì)胞間通訊、細(xì)胞遷移、血管新生和免疫調(diào)節(jié)等過(guò)程。基于細(xì)胞源性膜性囊泡天然的運(yùn)載屬性和良好的生物安全性，細(xì)胞源性膜性囊泡被認(rèn)為是極具前景的基因或藥物遞送平臺(tái).

與人工合成的載體(如脂質(zhì)體)相比，細(xì)胞源性膜性囊泡具有多種優(yōu)勢(shì)，例如免疫原性和毒性低，腫瘤主動(dòng)靶向性強(qiáng)，體液中天然穩(wěn)定性好。因此，如何將細(xì)胞源性膜性囊泡改造成治療疾病的載體是近年來(lái)相關(guān)研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)問(wèn)題，而且不少學(xué)者已經(jīng)取得了令人興奮的結(jié)果。但是，目前所有的關(guān)于細(xì)胞源性膜性囊泡載體的研究中所用到的細(xì)胞源性膜性囊泡幾乎都是通過(guò)體外細(xì)胞培養(yǎng)獲得的，這一途徑給膜性囊泡的實(shí)踐應(yīng)用帶來(lái)了諸多局限和隱憂：(1)獲取大量用于生產(chǎn)膜性囊泡的“母系細(xì)胞”是一個(gè)極其耗時(shí)耗力的工作，尤其對(duì)于那些無(wú)法增殖的細(xì)胞(例如血小板)，或者是需要從活體組織分離的原代細(xì)胞，這既增加了技術(shù)難度又耗費(fèi)大量財(cái)力；(2)體外培養(yǎng)細(xì)胞用于獲取膜性囊泡，其較低的產(chǎn)出率難以滿足臨床極大用量的需求；(3)細(xì)胞的體外培養(yǎng)是一個(gè)對(duì)刺激極其敏感的過(guò)程，培養(yǎng)條件的變異必然導(dǎo)致細(xì)胞生理狀態(tài)的改變，繼而影響其所分泌膜性囊泡的理化特性，導(dǎo)致實(shí)踐應(yīng)用中膜性囊泡生物學(xué)效應(yīng)的迥異；(4)細(xì)胞在漫長(zhǎng)的體外培養(yǎng)及傳代過(guò)程中，交叉污染的潛在可能也嚴(yán)重威脅這一產(chǎn)物在臨床應(yīng)用中的生物安全性；(5)異體來(lái)源細(xì)胞所分泌的膜性囊泡在活體應(yīng)用時(shí)也存在與宿主細(xì)胞發(fā)生免疫反應(yīng)的擔(dān)憂。當(dāng)前，上述的這些弊端嚴(yán)重阻礙了細(xì)胞源性膜性囊泡在臨床診療中的實(shí)踐應(yīng)用。