[發(fā)明專(zhuān)利]一種煙草中12種Amadori化合物的測(cè)定方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710554270.0
• 申請(qǐng)日: 2017-07-07
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107356689B
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-12-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王曉瑜;劉雷雨;王昇;秦亞瓊;張曉兵;崔華鵬;劉紹鋒;劉惠民
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 中國(guó)煙草總公司鄭州煙草研究院
• 主分類(lèi)號(hào): G01N30/02
• 分類(lèi)號(hào): G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 41119 鄭州睿信知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司
• 代理人: 牛愛(ài)周

本發(fā)明涉及一種煙草中12種Amadori化合物的測(cè)定方法，屬于煙草成分檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明煙草中12種Amadori化合物的測(cè)定方法，包括以下步驟：將煙末樣品在甲醇溶液中萃取20～40min，之后離心取上清液過(guò)濾，得濾液；將所得濾液稀釋5～20倍后，得待測(cè)液；將待測(cè)液進(jìn)行HPLC?MS/MS測(cè)定，采用外標(biāo)法定量。本發(fā)明測(cè)定方法可同時(shí)對(duì)煙草中12種無(wú)標(biāo)樣的Amadori化合物進(jìn)行近似定量檢測(cè)，操作簡(jiǎn)單、快速、重現(xiàn)性好、靈敏度高，對(duì)煙草品質(zhì)評(píng)價(jià)、卷煙配方開(kāi)發(fā)具有著重要指導(dǎo)意義。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種煙草中12種Amadori化合物的測(cè)定方法，屬于煙草成分檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

Amadori化合物是由還原糖和氨基酸(或其它含氨基基團(tuán)化合物)經(jīng)縮合、脫水、Amadori重排得到的一類(lèi)美拉德反應(yīng)的中間產(chǎn)物，即1-氨基-1-脫氧-2-酮糖。據(jù)報(bào)道，在烤煙煙葉中Amadori化合物總量在2％以上，是重要的煙草香味成分前體物，對(duì)卷煙的感官品質(zhì)具有重要作用。

關(guān)于Amadori化合物的測(cè)定，國(guó)外最早采用氨基酸分析儀、GC進(jìn)行測(cè)定，但均存在一定問(wèn)題，例如，氨基酸分析儀存在分離度不足、定性不準(zhǔn)確、干擾嚴(yán)重的問(wèn)題；而GC方法衍生化將引入多個(gè)異構(gòu)體，難以進(jìn)行定量。

2015年，賈春曉等人在《質(zhì)譜學(xué)報(bào)》上報(bào)道了一篇液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)測(cè)定煙草中6種Amadori化合物的文章，測(cè)定指標(biāo)數(shù)量較少。

公開(kāi)號(hào)為CN103499658A的中國(guó)發(fā)明專(zhuān)利公開(kāi)了一種煙草中Amadori化合物的同時(shí)測(cè)定方法，該方法的樣品前處理步驟包括萃取、過(guò)濾、凈化、HPLC-MS/MS測(cè)定步驟。其中凈化步驟需要向?yàn)V液中加入正己烷進(jìn)行萃取多次，再將甲醇-水相濃縮至干，用甲醇水溶液再定容，過(guò)有機(jī)濾膜，樣品前處理步驟繁瑣，需要引入多步的環(huán)己烷萃取，且樣品前處理步驟中需要對(duì)甲醇-水溶液進(jìn)行濃縮蒸干，而甲醇-水溶液的濃縮蒸干過(guò)程是必須引入進(jìn)行加熱的。但是，Amadori化合物由糖和氨基酸(或其他含氨基化合物)反應(yīng)生成的中間產(chǎn)物，在加熱的條件下，會(huì)導(dǎo)致Amadori化合物進(jìn)一步分解生成小分子的醛、酮、酸等物質(zhì)，致使部分Amadori化合物不能被檢測(cè)到。

公開(kāi)號(hào)為CN 106353434A的中國(guó)發(fā)明專(zhuān)利公開(kāi)了一種定量測(cè)定煙草中10種有標(biāo)樣的Amadori化合物的分析方法，公開(kāi)了一種簡(jiǎn)單、快速、前處理方法溫和、準(zhǔn)確度及精密度高且可同時(shí)定量測(cè)定煙草中多種Amadori化合物的分析方法。

但是，Amadori化合物市售標(biāo)樣價(jià)格昂貴，而且目前僅有10種左右。然而，目前常用氨基酸分析方法報(bào)道的氨基酸種類(lèi)有21種，加上氨，理論上可以形成至少22種葡萄糖型Amadori物質(zhì)。但是鑒于標(biāo)樣缺乏，目前未見(jiàn)任何關(guān)于其它無(wú)標(biāo)樣Amadori化合物定量方法的相關(guān)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種煙草中12種Amadori化合物的測(cè)定方法，實(shí)現(xiàn)對(duì)12種Amadori化合物進(jìn)行同時(shí)測(cè)定。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案是：

一種煙草中12種Amadori化合物的測(cè)定方法，包括以下步驟：

1)將煙末樣品在甲醇溶液中萃取20～40min，之后離心取上清液過(guò)濾，得濾液；

2)將步驟1)所得濾液稀釋5～20倍后，得待測(cè)液；

3)將待測(cè)液進(jìn)行HPLC-MS/MS測(cè)定，采用外標(biāo)法定量；所述Amadori化合物為Fru-Amb、Fru-Arg、Fru-Asp、Fru-Cys、Fru-Gln、Fru-Gly、Fru-His、Fru-Lys、Fru-Met、Fru-Ser、Fru-Thr和Fru-Tyr。

步驟1)中煙末樣品為將煙葉或煙絲樣品磨成粉，過(guò)篩而得。所述過(guò)篩為過(guò)40目篩。

上述煙葉為烤煙煙葉、香料煙煙葉或白肋煙煙葉。