[發明專利]一種從血清中獲取天然前白蛋白的方法

有效

• 申請號: 201710547374.9
• 申請日: 2017-07-06
• 公開（公告）號: CN107312082B
• 公開（公告）日: 2020-09-01
• 發明（設計）人: 徐建建;林源;譚韜;魏建波
• 申請（專利權）人: 四川新健康成生物股份有限公司
• 主分類號: C07K14/76
• 分類號: C07K14/76;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/30
• 代理公司: 成都行之專利代理事務所(普通合伙) 51220
• 代理人: 廖慧敏

本發明公開了一種從血清中獲取天然前白蛋白的方法，解決了現有技術中去除PA蛋白中的Alb蛋白的方式步驟復雜、速度慢或會導致目標蛋白變性的問題。本發明包括(1)血清過濾除脂肪后，調節pH值至4.60～4.90，加入Alb特異性結合物使Alb沉淀，離心過濾后收集濾液；(2)降低濾液的pH值至4.40～4.70，加入PA蛋白促凝劑后獲得PA蛋白沉淀；(3)PA蛋白沉淀復溶，透析制成成品。本發明能有效達到快速去除PA蛋白中的Alb蛋白的目的，且該方法具有成本低廉、效果顯著等優點。

技術領域

本發明涉及一種試劑盒及其制備方法，具體涉及一種從血清中獲取天然前白蛋白的方法及其制備方法。

背景技術

重組PA純度高，但在抗原決定簇和蛋白結構上與天然PA有差異，導致PA抗體對重組PA和天然PA存在不同的識別情況，并且重組PA價格昂貴，因而從血清中獲取高濃度天然前白蛋白是一種最為有效的方式。但是由于PA蛋白和Alb蛋白具有相近的等電點和分子量，現有技術中的分離純化過程難區分兩種蛋白，蛋白測定實驗發現，在Alb和PA的復合物中，隨著Alb蛋白濃度的逐漸升高PA蛋白濃度測定值逐步降低。因此，去除Alb蛋白顯得尤為重要。

東華大學的專利公開了一種固相萃取劑富集人血漿中前白蛋白的方法(申請號201610109013.1)，包括：將氧化石墨烯分散液超聲霧化，然后通過400℃～450℃的石英管，收集，干燥，得到石墨烯微球固相萃取劑；將氯化鈉加入到含有前白蛋白的血漿中，然后加入苯酚溶液，攪拌，靜置，離心，得上清液；將石墨烯微球加入到固相萃取柱，然后活化固相萃取柱，然后將上清液通過固相萃取柱，淋洗，真空泵抽至進干，洗脫，氮吹濃縮，進入HPLC分析檢測。該方法并未考慮去除白蛋白步驟，并且提取過程繁瑣、復雜。

山西瑞亞力科技有限公司的專利公開了從血漿中純化前白蛋白和視黃醇結合蛋白的方法(申請號201510019329.7)。該方法包括下述步驟：取血漿，使用陰離子交換柱對其進行第一次層析純化處理，獲得PA-RBP復合物初體；使用疏水柱對所述PA-RBP復合物初體進行第二次層析純化處理，得到純化后的PA-RBP復合物；將所述純化后的PA-RBP復合物進行解離處理，得到含有PA和RBP的混合樣品；使用疏水柱對將所述混合樣品進行第三次層析純化處理，分離得到PA和RBP。該方法并未考慮去除白蛋白步驟，并且提取過程繁瑣、復雜。

財團法人化學及血清療法研究所的專利公布了去除人血清白蛋白的方法(申請號：01805629.6)。具體而言，是將含有人血清白蛋白多聚體的人血清白蛋白溶液用鹽濃度為50～75mM的緩沖液進行透析，強陰離子交換體選擇性吸附白蛋白。該過程需要用到陰離子交換柱，去除過程還不夠快、簡化。

溫州醫學院的專利公布了一種用檸檬酸乙醇去除血清中白蛋白的方法。具體而言，包括如下步驟：1)將血清離心去除脂質；2)加入血清蛋白提取液，混勻后置于-20℃冰箱，靜置30min；3)樣品提取液離心；4)分別收集離心沉淀與上清液。去除過程中甲醇、乙醇、丙酮等有機溶劑可以提供自己的羥基或羰基上的氫或氧去形成氫鍵，從而破壞了蛋白質中原有的氫鍵，可能會使血清中的目標蛋白變性。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是：現有技術中去除PA蛋白中的Alb蛋白的方式步驟復雜、速度慢或會導致目標蛋白變性的問題，目的在于提供了一種從血清中獲取天然前白蛋白的方法，其通過試劑和工藝步驟的優化，在避免目的蛋白變性的同時，能有效達到快速去除PA蛋白中的Alb蛋白的目的，且該方法成本低廉、效果顯著。

本發明通過下述技術方案實現：

一種從血清中獲取天然前白蛋白的方法，包括：

(1)血清過濾除脂肪后，調節pH值至4.60～4.90，加入Alb特異性結合物使Alb沉淀，離心過濾后收集濾液；

(2)降低濾液的pH值至4.40～4.70，加入PA蛋白促凝劑后獲得PA蛋白沉淀；