[發明專利]五種豬腹瀉病毒多重PCR快速診斷試劑盒及其應用

有效

• 申請號: 201710534310.5
• 申請日: 2017-07-03
• 公開（公告）號: CN107419034B
• 公開（公告）日: 2020-09-29
• 發明（設計）人: 姜永厚;劉高鵬
• 申請（專利權）人: 杭州洪橋中科基因技術有限公司;浙江理工大學
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/686
• 代理公司: 杭州中成專利事務所有限公司 33212
• 代理人: 金祺

本發明公開了五種豬腹瀉病毒多重PCR快速診斷試劑盒，包括5對PCR引物，還包括PCR反應液、PCR標準品、陽性對照品、陰性對照品。本發明還同時公開了上述試劑盒在同時特異檢測五種豬腹瀉病毒感染中的應用，這五種豬腹瀉病毒為TGEV、GAR、GCR、PEDV和PCV2。

技術領域

本發明屬于病毒核酸檢測領域，具體涉及一種五種豬腹瀉病毒多重PCR快速診斷試劑盒，可在同一個反應管內同時檢測豬流行性腹瀉病毒(Porcine epidemic diarrheavirus,PEDV)、豬傳染性胃腸炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus,TGEV)、豬輪狀病毒A型(Porcine group A rotaviruses,GAR)、豬輪狀病毒C型(Porcine group Crotaviruses,GCR)、豬圓環病毒2型(Porcine circovirus 2,PCV2)五種豬病毒，適用于臨床及科研中對五種豬病毒的快速檢測。

背景技術

近年來，隨著養豬業向規模化和集約化方向發展，豬群發生多病原混合感染及繼發感染的情況越來越普遍。感染豬流行性腹瀉病毒(PEDV)、豬傳染性胃腸炎病毒(TGEV)、豬輪狀病毒A型(GAR)、豬輪狀病毒C型(GCR)、豬圓環病毒2型(PCV2)這幾種疾病在臨床上呈現出相似的腹瀉癥狀，并且它們常常呈混合感染，而且上述疾病的發生使對其它疾病如呼吸和繁殖障礙的診斷變得復雜和困難，死亡率很高，給養豬業造成重大損失。

豬流行性腹瀉(Porcine epidemic diarrhea，PED)是由豬流行性腹瀉病毒(Porcine epidemic diarrhea virus，PEDV)引起豬的一種以嘔吐、腹瀉和脫水為主要特征的腸道傳染病。該病以7日齡以內仔豬發病為主，病程短、傳播迅速、仔豬死亡率極高，可達100％。1978年，比利時和英國首次報道PEDV疫情，1984年，我國證實該病的存在。在2010-2012年中國不同地區均有PEDV大暴發的報道，造成哺乳仔豬大量死亡，嚴重影響了我國養豬業的健康發展。

豬傳染性胃腸炎病毒(TGEV)屬冠狀病毒科、冠狀病毒屬，基因組為單股正鏈不分節段的RNA，全長28.5kb。對小腸造成損傷，產生消化和吸收不良，最終導致腹瀉和脫水，引起哺乳仔豬死亡(Tuboly et al.,2000；南文金and婁高明,2010)。該病毒感染率高，造成的仔豬死亡率高(王黎等,2015)。

輪狀病毒(RV)屬于呼腸病毒科家族，無包膜，基因組是一條的11分段的雙鏈RNA(Estes and Cohen,1989)。RV是引起包括人類以及其他動物腹瀉的重要因素，目前輪狀病毒以VP6基因分成8個種，其中A、B、C、E和H(GAR、GBR、GCR、GER和GHR)都已經在豬上檢測出(Matthijnssens et al.,2012；Saif et al.,1980；Wakuda et al.,2011)。GAR在1975年首次報道，一直被認為是豬腹瀉的一個主要病原(Amimo et al.,2013a；Ciarlet et al.,2002；Ciarlet et al.,1995；Miyazaki et al.,2011,2012)。GCR在1979年首次被檢測出，很難進行細胞培養(Amimo et al.,2013b；Marthaler et al.,2013；Saif et al.,1988；Saif et al.,1996；Tsunemitsu et al.,1991)。GCR能引起嚴重胃腸感染且易造成散發性傳播或大爆發(Bohl et al.,1982；Collins et al.,2008；Saif et al.,1980)。一般GAR被認為是引起豬腹瀉的首因，而GBR、GCR的作用沒那么大。Douglas marthaler等應用RT-PCR檢測7508份豬腹瀉樣品的研究發現GAR的陽性率為62％，GCR感染率也很高(53％)，GCR主要感染1-20天仔豬，GAR主要感染21天以上仔豬。認為應該同時檢測GAR、GCR(Marthaler etal.,2014)。