[發明專利]一種TM4SF1特異性嵌合抗原受體及其應用

有效

• 申請號: 201710533614.X
• 申請日: 2017-07-03
• 公開（公告）號: CN107216395B
• 公開（公告）日: 2018-07-20
• 發明（設計）人: 郝瑞棟;劉根桃;吳國祥
• 申請（專利權）人: 上海科醫聯創生物科技有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N5/10;A61K35/17;A61P35/00
• 代理公司: 上海申新律師事務所 31272
• 代理人: 俞滌炯

本發明公開了一種TM4SF1特異性嵌合抗原受體，包含胞外識別區、鉸鏈區、跨膜區和胞內信號區，其中胞外識別區為scFv序列，鉸鏈區為CD8區域，跨膜區為CD8跨膜區或CD28跨膜區中的任一個，胞內信號區包含CD28、4?1BB、CD3ζ中的至少一個；上述嵌合抗原受體具體為L6?28Z、L6?BBZ和L6?28BBZ，其分別由SEQ ID NO.12～SEQ ID NO.14所示序列的核酸編碼；本發明還提供一種包含上述核酸的重組表達載體及其宿主細胞、構建方法、在哺乳動物腫瘤治療中的應用，本發明所述的TM4SF1特異性嵌合抗原受體可以通過修飾T細胞，并使特異性CAR?T細胞高效特異的治療實體腫瘤。

技術領域

本發明涉及生物免疫領域，具體地，本發明涉及一種TM4SF1特異性嵌合抗原受體及其應用。

背景技術

嵌合抗原受體(CAR)由抗原識別區、跨膜區、胞內信號區構成，一般通過病毒轉導或者電穿孔，使CAR分子表達在T細胞表面形成CAR-T細胞。CAR-T細胞通過胞外抗原識別區識別腫瘤抗原，招募T細胞到腫瘤細胞表面，并通過胞內信號區激活T細胞，使T細胞行使殺傷作用，以殺傷腫瘤細胞，從而達到治療腫瘤的目的。CAR分子的設計根據胞內信號區的不同經過了四代的發展，其中第一代CAR分子僅包含CD3ζ；第二代CAR分子除CD3ζ之外還包含一個共刺激因子，例如CD28，CD137，OX40等；第三代CAR分子同時包含串聯的兩個共刺激因子；第四代CAR分子中包含了IL-12等能改善腫瘤微環境的細胞因子。CAR-T通過靶向CD19分子在血液腫瘤方向取得突破性進展，部分研究中有效率達到了90％。但是，CAR-T在實體瘤領域一直沒有突破，所以迫切需要新的腫瘤靶點，新的CAR分子設計以促進其在實體瘤領域的應用。

TM4SF1(transmembrane-4L six family member 1)是一個整合在細胞質膜上的糖蛋白，在多種癌癥細胞中高度表達，包括肝細胞癌，非小細胞肺癌等；TM4SF1還高度表達在人癌癥血管的內皮細胞上。TM4SF1同時在多種組織器官中存在微弱的表達。TM4SF1功能在于能夠調控多種腫瘤細胞的運動性和粘附性。由于TM4SF1在多種腫瘤細胞中高表達同時與腫瘤內血管的生成有關，所以是一個潛在的腫瘤治療靶點。

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術中的缺陷，提供一種新的通過靶向TM4SF1的CAR分子，并證明其在實體瘤治療中的潛在應用。具體的說，本發明提供一種TM4SF1特異性嵌合抗原受體(CAR)，這種CAR分子通過靶向腫瘤細胞表面的TM4SF1蛋白并激活T細胞下游的信號通路，賦予T細胞殺傷帶有TM4SF1靶點腫瘤細胞的能力。

為實現上述目的，本發明采用如下技術方案：

本發明的第一個目的是提供一種TM4SF1特異性嵌合抗原受體，其包括包括胞外識別區、鉸鏈區、跨膜區和胞內信號區；其中，胞外識別區為抗-TM4SF1抗體序列。

為了進一步優化上述TM4SF1特異性嵌合抗原受體，本發明所采取的技術措施還包括：

優選地，所述抗-TM4SF1抗體序列為一種結合TM4SF1的單鏈可變區(scFv)序列，更優選地，在本發明一實施例中，該抗體序列為來源于本領域已公開的TM4SF1單克隆抗體L6，該TM4SF1單克隆抗體L6包括如SEQ ID NO.1所示的重鏈可變區(VH)氨基酸序列和如SEQ IDNO.2所示的輕鏈可變區(VL)氨基酸序列。

進一步地，根據scFv的構成規則，VH和VL序列通過一段柔性linker氨基酸序列為GGGGSGGGGSGGGGS連接到一起，形成scFv序列。

優選地，所述鉸鏈區為CD8hinge區域，其氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。

優選地，所述跨膜區所述跨膜區為CD8跨膜區或CD28跨膜區中的任一個，其中，所述CD8跨膜區的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示，所述CD28跨膜區的氨基酸序列如SEQ IDNO.5所示。