[發明專利]一種珍稀瀕危植物蒙古沙冬青離體快繁的方法

有效

• 申請號: 201710533059.0
• 申請日: 2017-07-03
• 公開（公告）號: CN107173231B
• 公開（公告）日: 2019-01-25
• 發明（設計）人: 郭琪;王沛雅;楊暉;楊濤;張軍;李鑫;鄭群
• 申請（專利權）人: 甘肅省科學院生物研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 甘肅省知識產權事務中心 62100
• 代理人: 張克勤

1.一種珍稀瀕危植物蒙古沙冬青離體快繁的方法，其特征在于包括如下步驟：

A、蒙古沙冬青外植體的獲得：

取消毒的蒙古沙冬青種子，在無菌條件下接種到含2.0mg/L 6-BA的MS培養基中，黑暗培養7-11d后，切取萌發幼苗的兩片子葉節作為外植體；

B、叢生芽的誘導培養：將所述步驟A中得到的外植體近軸面朝上，傾斜插入B₅培養基中，黑暗培養，然后用輔助光誘導15—20d；所述步驟B中叢生芽誘導培養基為含1.0 mg/L 6-BA的B₅培養基；

C、叢生芽的伸長培養：

從子葉節處誘導出叢生芽后，剔除剩余子葉，轉接于B₅培養基中，黑暗培養，然后用輔助光下伸長培養20—25 d；所述步驟C中伸長培養基為含1.0 mg/L 6-BA和0.2-0.3mg/LIAA的B₅培養基；

D、生根培養：

將所述步驟C中長度為2-3cm的叢生芽單株切下轉接到B₅培養基中培養7-10d后，轉接入B₅培養基生根培養基中誘導20—30d；所述步驟D中生根培養基為含1.0-2.0mg/LIBA的1/2B₅培養基；

E、擴大繁殖：

切割所述步驟D中獲得的完整植株的帶腋芽的莖段，轉入到含1.0mg/L 6-BA和0.2-0.3mg/LIAA的B5培養基，黑暗培養，然后用輔助光下伸長培養20—25d；待植株生長到2-3cm，轉接入含1.0-2.0mg/LIBA的1/2 B₅培養基中誘導生根30—40d。

2.根據權利要求1所述的一種珍稀瀕危植物蒙古沙冬青離體快繁的方法，其特征在于：所述步驟A蒙古沙冬青外植體的獲得具體步驟為，取萌發的幼苗，上胚軸粗度為3-5mm，保留子葉近胚軸的分生組織部分2-5mm和上胚軸2-4mm，切去了其余部分，然后在兩片子葉中間沿胚軸縱向切開，去掉了腋芽，在子葉與胚軸交接處切開2—4個傷口，得到兩個子葉節外植體。

3.根據權利要求1所述的一種珍稀瀕危植物蒙古沙冬青離體快繁的方法，其特征在于：所述步驟A、步驟B和步驟C中黑暗培養溫度為，白天22-26℃，夜間17-21℃。

4.根據權利要求1所述的一種珍稀瀕危植物蒙古沙冬青離體快繁的方法，其特征在于：所述步驟B、步驟C、步驟D、步驟E中黑暗培養時間為5-7d。

5.根據權利要求1所述的一種珍稀瀕危植物蒙古沙冬青離體快繁的方法，其特征在于：所述步驟B和C中輔助光的光周期為14 h/d，光強為1000-1500Lux。

6.根據權利要求1所述的一種珍稀瀕危植物蒙古沙冬青離體快繁的方法，其特征在于：所述步驟C中叢生芽特征為，芽叢生，芽數清晰，芽平均長0.3-0.5mm。

7.根據權利要求1所述的一種珍稀瀕危植物蒙古沙冬青離體快繁的方法，其特征在于：所述步驟D中叢生芽的特征為：叢生芽的平均長度為2-3cm。