[發明專利]一種重組α-半乳糖苷酶基因、載體、工程菌及其應用

有效

• 申請號: 201710522450.0
• 申請日: 2017-06-30
• 公開（公告）號: CN107164398B
• 公開（公告）日: 2020-05-26
• 發明（設計）人: 朱廷恒;潘艷青;潘籽龍;孫徽;汪琨;王渭霞
• 申請（專利權）人: 浙江工業大學
• 主分類號: C12N15/56
• 分類號: C12N15/56;C12N9/40;C12N1/19;C12P17/10;C12R1/865
• 代理公司: 杭州天正專利事務所有限公司 33201
• 代理人: 黃美娟;李世玉

1.一種重組α-半乳糖苷酶基因，其特征在于所述基因的核苷酸序列為SEQ ID NO.1所示。

2.一種權利要求1所述重組α-半乳糖苷酶基因編碼的重組α-半乳糖苷酶，其特征在于所述酶的氨基酸序列為SEQ ID NO.2所示。

3.一種由權利要求1所述重組α-半乳糖苷酶基因構建的重組載體。

4.一種由權利要求3所述重組載體轉化制備的重組α-半乳糖苷酶基因工程菌。

5.如權利要求4所述的重組基因工程菌，其特征在于所述重組α-半乳糖苷酶基因工程菌以釀酒酵母為宿主菌構建而成。

6.一種權利要求2所述重組α-半乳糖苷酶在降解含α-半乳糖苷鍵底物中的應用。

7.如權利要求6所述的應用，其特征在于所述的底物為5-溴-4-氯-3-吲哚-α-D-半乳糖苷或棉子糖。

8.如權利要求7所述的應用，其特征在于所述的底物為5-溴-4-氯-3-吲哚-α-D-半乳糖苷，所述的應用為：將重組α-半乳糖苷酶基因工程菌接種至添加有底物和IPTG的YNB篩選培養基，在30℃培養完全，獲得降解產物5-氯-4-溴-3-吲哚；所述底物以4mg/mL二甲基甲酰胺溶液的形式加入，所述底物溶液與IPTG體積比為1.5:1。

9.如權利要求6所述的應用，其特征在于所述的底物為棉子糖，所述的應用為：將重組α-半乳糖苷酶基因釀酒酵母工程菌接種至YNB篩選培養基，在30℃、180rpm條件下培養到對數期，然后以體積濃度10％的接種量轉接入YPGR誘導培養基中進行表達，30℃培養12h后，將發酵液離心收集細胞后，超聲波破碎后，取破碎混合液與棉子糖溶液以體積比1:1混合，60℃水解反應完全，實現對棉子糖的降解；所述棉子糖溶液是以pH5.5、50mM的MES緩沖液為溶劑配制成0.01g/mL；所述YPGR誘導培養基終濃度組成：蛋白胨20g/L，酵母提取物10g/L，棉子 糖20g/L，半乳糖20g/L，溶劑為水，pH自然。