[發(fā)明專利]一種微生物載體的制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710518205.2
• 申請日: 2017-06-29
• 公開（公告）號: CN107267495B
• 公開（公告）日: 2021-01-19
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 陳軍;林茂蘭
• 申請（專利權(quán)）人: 上海同柏宸科生物技術(shù)有限公司
• 主分類號: C12N11/14
• 分類號: C12N11/14;C01B25/32
• 代理公司: 上海宏京知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 31297
• 代理人: 崔巍

本發(fā)明涉及微生物固定技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種微生物載體的制備方法。本發(fā)明利用多孔棉花秸稈作為模板，以EDTA為導向劑，提高羥基磷酸鈣的純度，制得多孔高負載量羥基磷酸鈣載體，并在其表面負載苔蘚為微生物生長提供場所和營養(yǎng)，利用羥基磷酸鈣的良好機械性能和極佳的生物相容性，最終制得高生物負載量的微生物載體，彌補了常見微生物載體機械性能差，生物相容性低以及生物負載量少的缺陷，具有廣闊的應(yīng)用前景。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及微生物固定技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種微生物載體的制備方法。

背景技術(shù)

固定化微生物技術(shù)自問世以來，顯示出廣闊的發(fā)展前景。固定化微生物在乙醇發(fā)酵工業(yè)上成果較為顯著，固定化酵母菌用于發(fā)酵酒精與傳統(tǒng)發(fā)酵工藝相比，具有速度快、周期短、生產(chǎn)能力高、工藝設(shè)備簡單，易于實現(xiàn)連續(xù)化及自動化和產(chǎn)物容易提取等優(yōu)點，并在一定程度上減少發(fā)酵工廠的設(shè)備投資和環(huán)境污染。

選擇適宜的固定化微生物載體是實現(xiàn)工業(yè)化的關(guān)鍵，而載體的好壞又取決于載體的機械強度、壽命和包埋微生物細胞的容量和活性。固定載體中應(yīng)用最廣泛的是海藻酸鈣，雖易成形、無毒、成本低廉，但強度差，使用壽命短。其它的一些天然高分子化合物，如瓊脂，明膠和卡拉膠等，雖強度得到改善，但價格偏高。聚乙烯醇作為包埋載體的優(yōu)點有機械強度高、化學性能穩(wěn)定，但是其生物相容性差，對微生物的負載量小。

因此，發(fā)明一種既具有良好的生物相容性，又具有較強的機械強度的新型微生物載體對微生物固定技術(shù)領(lǐng)域具有積極的意義。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明主要解決的技術(shù)問題，針對目前常見的微生物固定載體存在機械強度低、生物相容性差、微生物負載量低的缺陷，提供了一種微生物載體的制備方法。

為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是：

一種微生物載體的制備方法，其特征在于具體制備步驟為：

（1）稱取牡蠣殼放入水中加熱煮沸處理，取出煮沸后的牡蠣殼粉碎得到牡蠣殼粉末，將牡蠣殼粉末和鹽酸混合后攪拌反應(yīng)，再離心處理，分離得到上層液，備用；

（2）稱取棉花秸稈切割成小段，得到棉花秸稈段，將棉花秸稈段和沼液混合后靜置微腐處理，微腐處理結(jié)束后粉碎并過50目篩，得到微腐棉花秸稈粉末；

（3）將微腐棉花秸稈粉末和無水乙醇混合后加熱升溫，攪拌反應(yīng)后得到混合懸浮液，將五氧化二磷和混合懸浮液混合后超聲分散處理，得到分散液，再用氨水調(diào)節(jié)分散液pH至9.0～9.5，得到前驅(qū)液；

（4）將備用的上層液和乙二胺四乙酸混合均勻得到滴加液，將滴加液滴入上述前驅(qū)液中，進行微波輻照處理，處理結(jié)束后靜置陳化，過濾分離得到濾渣；

（5）將上述濾渣放入馬弗爐中，保溫煅燒，得到多孔羥基磷灰石支架，將細葉泥炭蘚和水按等質(zhì)量比混合后研磨，得到苔蘚漿，將多孔羥基磷灰石支架和苔蘚漿混合得到預(yù)處理混合物；

（6）將上述預(yù)處理混合物放入溫室中，靜置7～9天，靜置結(jié)束后得到產(chǎn)物，用水沖洗產(chǎn)物15～20min，自然晾干后即得微生物載體。

根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種微生物載體的制備方法，其特征在于：步驟（1）中所述的煮沸處理時間為1～2h，牡蠣殼粉末和鹽酸的質(zhì)量比為1:5，鹽酸的濃度為0.1mol/L，攪拌反應(yīng)時間為1～2h，離心處理轉(zhuǎn)速為2000～3000r/min，離心處理時間為10～15min。

步驟（2）中所述的小段的長度為1～2cm，棉花秸稈段和沼液的質(zhì)量比為1:3，靜置微腐處理的溫度為35～45℃，靜置微腐處理的時間為3～5天。

步驟（3）中所述的微腐棉花秸稈粉末和無水乙醇的質(zhì)量比為1：10，加熱升溫后的溫度為40～50℃，攪拌反應(yīng)時間為1～2h，五氧化二磷和混合懸浮液的質(zhì)量比為1:15，超聲分散處理頻率為30～40kHz，超聲分散處理時間為30～40min。