[發明專利]一種補肺活血膠囊HPLC指紋圖譜的構建方法及標準指紋圖譜

有效

• 申請號: 201710516710.3
• 申請日: 2017-06-29
• 公開（公告）號: CN107505418B
• 公開（公告）日: 2020-03-06
• 發明（設計）人: 蘇薇薇;唐清;關澤明;關敏怡;朱曉梟;謝揚輝;鄭玉瑩;彭維
• 申請（專利權）人: 中山大學;廣東雷允上藥業有限公司
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06;G01N30/02
• 代理公司: 廣州容大專利代理事務所(普通合伙) 44326
• 代理人: 劉新年;黃開艷

本發明涉及補肺活血膠囊HPLC指紋圖譜的構建方法及其標準指紋圖譜。該方法是，精密制備補肺活血膠囊內容物50％甲醇溶液作為供試品溶液及毛蕊異黃酮葡萄糖苷、毛蕊異黃酮、芍藥苷、異補骨脂素和補骨脂素濃度為各50μg/ml的混合溶液作為對照品溶液；在特定的色譜條件下得補肺活血膠囊HPLC指紋圖譜。通過對10批以上的補肺活血膠囊樣品構建的HPLC指紋圖譜并進行分析比較，找出其共有特征峰得到包含12個共有色譜峰的標準指紋圖譜。該方法能對成品的質量進行監控；為補肺活血膠囊的標準化研究提供科學依據。

技術領域

本發明涉及補肺活血膠囊HPLC指紋圖譜的構建方法及其標準指紋圖譜。

背景技術

補肺活血膠囊收錄于2015年版《中國藥典》第一部，由黃芪、赤芍、補骨脂三種藥制成。中藥理論認為，黃芪補氣，赤芍化淤，補骨脂納氣平喘。三藥合用具有益氣活血、補肺固腎的功效，用于肺心病(緩解期)屬氣虛血瘀證，證見咳嗽氣促，或咳喘胸悶，心悸氣短，肢冷乏力，腰膝酸軟，口唇紫紺，舌淡苔白或舌紫暗等。本發明提供一種補肺活血膠囊HPLC指紋圖譜的構建方法，通過補肺活血膠囊標準指紋圖譜，能對其質量進行監控，確保成品的均一性。

發明內容

本發明提供一種補肺活血膠囊HPLC指紋圖譜的構建方法。該方法能對成品的質量進行監控；為補肺活血膠囊的標準化研究提供了科學依據。

本發明補肺活血膠囊HPLC指紋圖譜的構建方法，包括以下步驟：

(1)供試品溶液的制備：取本品內容物，研細，取約1.2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50ml，稱定重量，加熱回流1小時，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續濾液25ml，回收溶劑至干，殘渣加50％甲醇溶解，定量轉移至5ml量瓶中，加50％甲醇至刻度，搖勻，即得。

(2)對照品溶液的制備：分別稱取毛蕊異黃酮葡萄糖苷、毛蕊異黃酮、芍藥苷、異補骨脂素、補骨脂素對照品適量，制成濃度為各50μg/ml的混合溶液。

(3)采用高效液相色譜法分析上述供試品溶液和對照品溶液，得到補肺活血膠囊高效液相色譜指紋圖譜，色譜條件為：進樣量10μl；色譜柱為Hitachi High-Tech C18(4.6×250mm，5μm)；流以乙腈為流動相A，0.2％甲酸溶液為流動相B，進行梯度洗脫，0～25min，16％A，84％B，25～65min，16～42％A，84～58％B；柱溫25℃；檢測波長260nm。

質譜工作參數：離子噴霧電壓1500V；噴霧氣壓50psi；輔助加熱氣壓60psi；溫度550℃；氣簾氣壓15psi；碰撞氣壓8psi；入口電壓10V；采用電噴霧離子源，正離子模式進行檢測。

本發明通過對10批補肺活血膠囊構建的HPLC指紋圖譜并進行分析比較，找出其共有特征峰得到補肺活血膠囊標準指紋圖譜。

補肺活血膠囊標準指紋圖譜檢測出12個共有色譜峰，歸屬于黃芪的共有峰為4號峰、8號峰、10號峰，歸屬于赤芍的共有峰為2號峰、5號峰、6號峰、7號峰，歸屬于補骨脂的共有峰為1號峰、3號峰、9號峰、11號峰、12號峰。利用DAD檢測器和超快液相色譜-四級桿串聯飛行時間質譜聯用(UFLC-TRIPLE TOF-DAD-MS/MS)技術手段對主要峰進行色譜峰歸屬及峰純度檢測，通過UV吸收曲線的比較，結合質譜的分子離子峰、裂解碎片信息鑒定：1號峰為補骨脂苷、2號峰為芍藥苷、3號峰為異補骨脂苷、4號峰為毛蕊異黃酮葡萄糖苷、5號峰為沒食子酰芍藥苷、6號峰為1,2,3,4,6-五沒食子酰葡萄糖、10號峰為毛蕊異黃酮、11號峰為補骨脂素、12號峰為異補骨脂素。所述圖譜的圖形如說明書附圖中的圖1所示的圖譜。以4號峰毛蕊異黃酮葡萄糖苷為參照物峰，補肺活血膠囊指紋圖一共有峰的相對保留值列表如下：

附圖說明