[發(fā)明專利]一種新型的21種人乳頭瘤病毒亞型分型試劑盒和方法

有效

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• 申請日: 2017-06-28
• 公開（公告）號: CN107130059B
• 公開（公告）日: 2018-07-20
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王建平
• 申請（專利權(quán)）人: 廣州市寶創(chuàng)生物技術(shù)有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/686;C12R1/93
• 代理公司: 廣州華進聯(lián)合專利商標(biāo)代理有限公司 44224
• 代理人: 萬志香

本發(fā)明涉及一種能夠通過數(shù)列組合與納米金探針法檢測方法相結(jié)合、實現(xiàn)以較少的檢測反應(yīng)管數(shù)區(qū)分更多的HPV亞型的試劑盒和方法。通過一種特定的數(shù)列組合，實現(xiàn)以6個檢測管區(qū)分21種分型人乳頭瘤病毒亞型。本發(fā)明將這種數(shù)學(xué)排列組合算法與分子診斷技術(shù)相結(jié)合，在不增加檢測反應(yīng)通量的情況下，實現(xiàn)以最少的反應(yīng)管數(shù)區(qū)分更多的人乳頭瘤病毒亞型，以降低檢測操作難度和檢測成本。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于分子生物技術(shù)和基因檢測領(lǐng)域，具體是一種用于21種人乳頭瘤病毒亞型分型的試劑盒和方法。

背景技術(shù)

人乳頭瘤病毒(Human Papilloma virus,HPV)屬于乳頭瘤病毒科，是一種小分子的、無被膜包被的環(huán)狀雙鏈DNA病毒，基因組長約8000堿基對(bp)，分為3個功能區(qū)，即早期轉(zhuǎn)錄區(qū)(E區(qū))、晚期轉(zhuǎn)錄區(qū)(L區(qū))和非轉(zhuǎn)錄區(qū)(長控制區(qū)，LCR)。人乳頭瘤病毒通過直接或間接接觸污染物品或性傳播感染人類。該病毒不但具有宿主特異性，而且具有組織特異性，只能感染人的皮膚和粘膜上皮細(xì)胞，引起人類皮膚的多種乳頭狀瘤或疣及生殖道上皮增生性損傷。

對于感染生殖道和肛門的人乳頭瘤病毒，根據(jù)各基因型別致病力大小或致癌危險性大小可分為低危型和高危型兩大類。在有性生活史的女性中生殖道人乳頭瘤病毒感染具有普遍性，據(jù)統(tǒng)計70％～80％的女性在其一生中會有至少一次的人乳頭瘤病毒感染，但大多數(shù)感染為自限性，超過90％的感染的女性會出現(xiàn)一種有效的免疫應(yīng)答，在沒有任何長期的健康干預(yù)時在6到24個月之間可以清除感染。而持續(xù)性的高危型人乳頭瘤病毒感染則是導(dǎo)致宮頸上皮內(nèi)瘤變及宮頸癌的主要原因。全球范圍的研究結(jié)果顯示，在99.7％的宮頸癌患者體內(nèi)檢測到高危型人乳頭瘤病毒DNA的存在，其中人乳頭瘤病毒16型、18型、45型和31型感染占80％。低危型人乳頭瘤病毒一般與尖銳濕疣或低度鱗狀上皮內(nèi)病變相關(guān)，極少引起浸潤癌。國家CFDA也已經(jīng)頒布了人乳頭瘤病毒(HPV)核酸檢測及基因分型試劑技術(shù)審查指導(dǎo)原則，說明人乳頭瘤病毒檢測具有十分重要的臨床意義。

根據(jù)HPV的同源性，已發(fā)現(xiàn)120多種型別。目前，市場上已經(jīng)存在一些對人乳頭瘤病毒進行檢測的試劑盒，但是這些試劑盒通常是借助于熒光或者膜雜交的方式完成檢測。

納米金探針法區(qū)分不同亞型的病毒的步驟主要有以下三個階段，而這三個階段均是在同管閉管條件下完成的。第一階段：模板擴增，通過引物對、擴增酶的參與，實現(xiàn)對目標(biāo)模板的高靈敏擴增；第二階段：通過探針和內(nèi)切酶的參與，實現(xiàn)對目標(biāo)模板向信號分子的的高效率轉(zhuǎn)化；第三階段：通過納米金探針實現(xiàn)對信號分子的高分辨識別。但由于涉及到多種型別的區(qū)分，檢測時復(fù)雜，耗時耗力。

目前，市場上尚沒有將數(shù)學(xué)排列組合的算法與納米金探針法檢測方法相結(jié)合的人乳頭瘤病毒分型方法，只需要普通的PCR循環(huán)儀器就能以較少的管數(shù)分型更多的人乳頭瘤病毒亞型數(shù)，如以7管檢測反應(yīng)實現(xiàn)21種亞型的人乳頭瘤病毒分型。

發(fā)明內(nèi)容

基于此，本發(fā)明的目的提供一種21種HPV亞型的分型試劑盒和分型方法，其為將數(shù)學(xué)排列組合的算法與納米金探針法檢測方法相結(jié)合，在無需增加通量的情況下、實現(xiàn)以較少的檢測反應(yīng)管數(shù)區(qū)分21種的HPV亞型。

實現(xiàn)以上目的的技術(shù)方案如下。

一種21種HPV亞型的分型試劑盒，包括以下至少6個檢測管，其中，

第一管包含有對應(yīng)的檢測引物和針對6種型號的探針；

第二管包含有對應(yīng)的檢測引物和針對6種型號的檢測探針，第二管中所針對的探針的型號只有一種與第一管中的型號相同；

第三管包含有對應(yīng)的檢測引物和針對6種型號的探針，第三管中所針對的檢測探針的型號只有一種與第一管中的型號相同，且只有一種與第二管中的型號相同；

第四管包含有對應(yīng)的檢測引物和針對6種型號的檢測探針，第四管中所針對的檢測引物和探針的型號只有一種與第一管中的型號相同，且只有一種與第二管中的型號相同，且只有一種與第三管中的型號相同；