[發(fā)明專利]用于基因甲基化檢測的引物和探針、采樣方法、試劑盒在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201710502734.3 | 申請日： | 2017-06-27 |
| 公開（公告）號： | CN107164524A | 公開（公告）日： | 2017-09-15 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 喻德華;梁秋菊 | 申請（專利權(quán)）人： | 深圳市優(yōu)圣康生物科技有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 518000 廣東省深圳市*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 用于 基因 甲基化 檢測 引物 探針 采樣 方法 試劑盒 | ||
1.用于基因甲基化檢測的引物和探針，其特征在于，
引物包括特異性甲基化正鏈引物和特異性甲基化反鏈引物；特異性甲基化正鏈引物包括正鏈正向引物，一條選自A組和正鏈反向引物，一條選自B組，特異性甲基化反鏈引物包括反鏈正向引物，一條選自C組和反鏈反向引物，一條選自D組；
探針包括特異性甲基化正鏈探針，一條選自E組和特異性甲基化反鏈探針，一條選自F組；
具體為：
A組:正鏈正向引物：
GATTCGTTGTTTATTAGTTATTATGT
TTCATTCAGCTGAGCCAGGG
GAAGGTGGGTGTTGGGTT
B組:正鏈反向引物：
AAATAATCCCATCCAACTA
GGGCAGCGGCGAGGAA
CCCGTCCCGCGCCAAA
E組:特異性甲基化正鏈探針：
TTAACCGCGAAATCCGAC
TCCGGCGGCTAGCTCTGCAC
TCGCGGACGTGTTGGAGA
C組:反鏈正向引物：
TAGTAATTTATTTTGTTAGTTTAGT
TATTTAGTTGCGCGTTGATC
AGAGTTAGTCGTCGGAGGAG
D組:反鏈反向引物：
CATCATATCCCACCAAC
CTCCTCCGACGACTAACTCT
ATACGAATACGAAAACCTAATC
F組:特異性甲基化反鏈探針：
AATTCGCGTATACCGTCAT
GTAGCGGGTCGCGCGGAGGGT
TTTTTTCGCGCGTTGCGTTTTC。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于基因甲基化檢測的引物和探針，其特征在于，設(shè)有正鏈非甲基化封閉引物，一條選自G組和反鏈非甲基化封閉引物，一條選自H組；
具體為：
G組:正鏈非甲基化封閉引物：
GTTATTATGTTGGATTTTGTGGTTAATGTGTAG
GAGTTAGGGGGTTTAGGGGTTTTTTTGGTGGTT
GGTTGTTGCGGTCGCGGACGTGTTGGAGAGGATTT
H組:反鏈非甲基化封閉引物：
CATCATATCAAACCCCACAATCAACACACAAC
GTTGATTGTGGGGTTTGATATGATGGTTGGTGGGTA
GAGGAGTTTTTAGGTTTTTTGGTTTAGTTGAATGA。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用于基因甲基化檢測的引物和探針，其特征在于，正鏈非甲基化封閉引物和反鏈非甲基化封閉引物用磷酸化、間臂、MGB或PNA中的一種修飾或多種修飾。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用于基因甲基化檢測的引物和探針，其特征在于，探針為Taqman探針；所述的熒光標(biāo)記可以為FAM、VIC/JOE、NED/TAMRA/Cy3、ROX/TexasRed或Cy5中的一種或多種；淬滅基團可以為TAMRA、BHQ1或ECLIPSE中的一種或多種。
5.權(quán)利要求1至4任一用于基因甲基化檢測的引物和探針，其特征在于，用于檢測結(jié)直腸癌的SEPT9基因甲基化的正鏈和反鏈相關(guān)序列。
6.權(quán)利要求1至4所述用于基因甲基化的引物和探針的采樣方法，其特征在于，按如下步驟進(jìn)行：獲取待測樣本；對待測樣本進(jìn)行重亞硫酸鹽處理；將經(jīng)過重亞硫酸鹽處理后的樣本，使用熒光定量PCR法同時檢測基因甲基化的正反鏈，其中包括特異性甲基化正鏈引物和特異性甲基化反鏈引物。
7.權(quán)利要求1至4所述用于基因甲基化檢測的引物和探針的試劑盒，其特征在于，包含一種或者多種內(nèi)參基因；所述內(nèi)參基因為ACTB,ALU,GAPDH等管家基因中的一種或者多種；內(nèi)參基因序列為：
ACTB正向引物：TAATTTGTGTGTGTGTTTTGGGGTTTG
ACTB反向引物：CCTCCACCCAATTCAAACAACACCAA
ACTB探針：AAATACACACAAACACCCA
ALU正向引物：GGTTAGGTATAGTGGTTTATATTTGTAATTTTAGTA
ALU反向引物：ATTAACTAAACTAATCTTAAACTCCTAACCTCA
ALU探針：CCTACCTTAACCTCCC
GAPDH正向引物：TTGGAAAAGGATATTTTTATTGTAAAA
GAPDH反向引物：AATTCCCCAAAACACCCAAACACCCA
GAPDH探針：CTAACCTTTAAAATCAAAT。
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