[發(fā)明專利]一種桉樹良種尾赤桉DH191?4的組培快繁方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710502628.5
• 申請日: 2017-06-27
• 公開（公告）號: CN107258537A
• 公開（公告）日: 2017-10-20
• 發(fā)明（設計）人: 唐再生;李麗芳;張磊;王建忠;熊濤;邱炳發(fā);陳德文;莫繼有;蘭俊;黎懷玲;陳東林;陳遠龍;沈云;吳兵;龐貞武;黃全東;梁秀莉;韋炳儉;吳滿芬;俸榮娣
• 申請（專利權(quán)）人: 廣西壯族自治區(qū)國有東門林場
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 南寧市來來專利代理事務所(普通合伙)45118
• 代理人: 李瑞環(huán)

1.一種桉樹良種尾赤桉DH191-4的組培快繁方法，其特征在于：采用廣西壯族自治區(qū)林木品種審定委員會審定的桉樹良種尾赤桉DH191-4無性系原株，伐倒或環(huán)割促萌后，以萌芽條帶潛伏芽的莖段作為外殖體，通過帶芽莖段離體誘導無菌芽，經(jīng)過對無菌芽的繼代增殖培養(yǎng)、生根培養(yǎng)和生根苗移栽，獲得再生植株。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的桉樹良種尾赤桉DH191-4的組培快繁方法，其特征在于：所述方法具體步驟如下：

（1）在桉樹良種尾赤桉DH191-4無性系試驗林中，選出優(yōu)樹原株；

（2）將DH191-4優(yōu)樹原株在離地面10-15cm高度處伐倒或環(huán)割，促萌芽，當萌芽條長至10-15cm時，剪取萌芽條，用水浸泡基部，帶回實驗室備用；

（3）萌芽條修剪去葉片，用自來水流水沖洗30min，再用飽和洗衣粉溶液洗滌10min，用純凈水清洗干凈；

（4）在超凈工作臺上，將萌芽條剪去嫩梢段和基部老化部分，切取長2-3cm，保留有1-2個潛伏芽的切段做表面滅活材料；

（5）將待滅活材料置于高壓滅菌處理過的無菌瓶中，用體積分數(shù)為75%的酒精溶液浸泡15-17s，無菌水清洗3-5次，洗去殘留酒精，再用質(zhì)量分數(shù)為0.1%HgCL₂溶液浸泡，并適當攪拌，7-9min后倒去HgCL₂溶液至專用收集罐中，用無菌水清洗材料5-6次，洗去殘留在材料表面的HgCL₂溶液；

（6）用滅菌后的鑷子夾取清洗好的莖段，放置在滅菌的接種碟上，用無菌濾紙吸干附著在材料表面水分后，切去葉柄和莖段的兩端，接種到無菌芽誘導培養(yǎng)基上，每瓶接種一支外植體，全暗培養(yǎng)8-12d，溫度26±2℃，腋芽開始萌動并不斷生長，轉(zhuǎn)入光照條件下培養(yǎng)15-20d，光照時間12h/d，光照強度1500-2000lux，培養(yǎng)溫度26±2℃；

（7）外殖體萌芽后，側(cè)芽和不定芽大量生長，選取沒有污染的無菌芽，切割后轉(zhuǎn)入繼代增殖培養(yǎng)基上培養(yǎng)18-23天；培養(yǎng)條件：溫度26±2℃，光照強度2000-2500lux；

（8）選取芽苗長2-3cm，并有3-4個節(jié)的繼代芽苗，切成長1.5-1.8cm的單芽，插入生根培養(yǎng)基上培養(yǎng)，每瓶接種25株，培養(yǎng)條件：溫度28-30℃，光照強度1200-1500lux；培養(yǎng)6-10天后，待切口冒出短根或根點，出根率達到60%時，移瓶至溫度28-35℃，光照強度3000-5000lux的自然光下繼續(xù)培養(yǎng)15-20天；待生根瓶苗高達3.0-4.5cm，葉片4-6對，根系發(fā)達，主側(cè)根明顯時培養(yǎng)結(jié)束；

（9）選取根系發(fā)達的生根瓶苗，洗去根部粘附的瓊脂，移栽至用KMnO₄消毒過的黃心土和蛭石做基質(zhì)的營養(yǎng)杯或輕基質(zhì)育苗杯上，培養(yǎng)60-80d，得到苗高20-25cm，地徑0.3-0.4cm的再生植株。

3.根據(jù)權(quán)利要求1-2任一項所述的桉樹良種尾赤桉DH191-4的組培快繁方法，其特征在于：所述的桉樹良種尾赤桉DH191-4是由東門林場培育，經(jīng)廣西壯族自治區(qū)林木品種審定委員會審定的尾葉桉×赤桉（E.urophylla ×E.camaldulensis）雜種子代的優(yōu)良單株繁育的無性系，性狀為：速生豐產(chǎn)性和耐寒性。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的桉樹良種尾赤桉DH191-4的組培快繁方法，其特征在于：所述步驟（6）中的無菌芽誘導培養(yǎng)基組成為：改良MS+N6芐基腺嘌呤（6-BA)1.0mg/L+萘乙酸（NAA）0.2-0.4mg/L+維生素C(Vc)2.0 mg/L+核黃素(維生素B2)7.0 mg/L+半胱氨酸4.5g/L+蔗糖30g/L+瓊脂3.75g/L，pH 5.8-6.2。

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的桉樹良種尾赤桉DH191-4的組培快繁方法，其特征在于：所述步驟（7）中的繼代增殖培養(yǎng)基組成為：改良MS+N6芐基腺嘌呤（6-BA)0.3-0.5mg/L+萘乙酸(NAA)0.1-0.15mg/L+核黃素(維生素B2)7.0 mg/L+維生素C 2.0mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂3.75g/L，pH 5.8-6.0。

6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的桉樹良種尾赤桉DH191-4的組培快繁方法，其特征在于：所述步驟（8）中的生根培養(yǎng)基為：1/2改良MS+ABT₁0.6mg/L+IBA 0.1mg/L+蔗糖15g/L+瓊脂4.2mg/L，pH 6.0-6.4。