[發明專利]一株籃狀菌及利用該籃狀菌液體菌膜發酵生產甜菜苷的方法

有效

• 申請號: 201710501743.0
• 申請日: 2017-06-27
• 公開（公告）號: CN107267400B
• 公開（公告）日: 2020-03-10
• 發明（設計）人: 王海磊;李平;張永梅
• 申請（專利權）人: 河南師范大學
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12P17/16;C12R1/645
• 代理公司: 新鄉市平原智匯知識產權代理事務所(普通合伙) 41139
• 代理人: 路寬

1.一株籃狀菌，其特征在于所述籃狀菌的分類命名為Talaromyces sp.WLP，于2017年4月19日保藏于武漢大學中國典型培養物保藏中心，保藏編號為CCTCC NO：M 2017199。

2.一種利用權利要求1所述的籃狀菌液體菌膜發酵生產甜菜苷的方法，其特征在于具體過程為：將籃狀菌在液體發酵培養基中通過液體培養形成菌膜后靜置培養產生甜菜苷，其中液體發酵培養基由以下成分組成：馬鈴薯200g/L、葡萄糖15.0g/L、FeSO₄ 2.0g/L、CuSO₄0.5g/L、K₂HPO₄ 1.0g/L和KH₂PO₄ 1.0g/L，pH 7.0。

3.根據權利要求2所述的利用籃狀菌液體菌膜發酵生產甜菜苷的方法，其特征在于具體步驟為：

（1）培養基的配制

斜面培養基的配制：馬鈴薯200g/L、葡萄糖15.0g/L、FeSO₄ 2.0g/L、CuSO₄ 0.5g/L、K₂HPO₄ 1.0g/L、KH₂PO₄ 1.0g/L和瓊脂20g/L，pH自然；

液體發酵培養基的配制：將200g去皮馬鈴薯切成小塊，加水煮沸30min，用8層紗布過濾，加葡萄糖15.0g/L、FeSO₄ 2.0g/L、CuSO₄ 0.5g/L、K₂HPO₄ 1.0g/L和KH₂PO₄ 1.0g/L，蒸餾水補足至總體積1000mL，調節pH值至7.0；

（2）色素發酵

將籃狀菌接種至斜面培養基中進行菌株活化，30℃恒溫培養箱中培養3天，將活化后的斜面分生孢子用無菌水制成濃度為4×10¹⁰個/mL的分生孢子懸液，再將分生孢子懸液接入到1000mL三角瓶中，該三角瓶內裝有600mL液體發酵培養基，分生孢子的接種量為5mL，將三角瓶置于恒溫搖床中在32℃、150rpm的條件下培養40h，待菌絲球大量形成時，轉為靜置培養，1天后液體發酵培養基表面菌膜形成，此時甜菜苷開始產生，然后再靜置培養6-7天；

（3）甜菜苷的制備

籃狀菌液體菌膜發酵結束后，發酵液抽濾去除菌體，上清液采用旋轉蒸發儀真空濃縮，溫度控制在50℃以下，濃縮至原體積的一半后加入兩倍濃縮液體積的體積分數為95%的乙醇，放置過夜后再用布氏漏斗真空抽濾去除生物大分子，上清液繼續進行真空濃縮脫醇至半固體，而后于-20℃冷凍過夜，將結冰的色素固體置于真空冷凍干燥機中，控制真空度為50Pa，溫度為-35℃，冷凍時間為18h，得到干燥好的甜菜苷粗品，再將甜菜苷粗品進行分離純化得到甜菜苷純品。

4.根據權利要求3所述的利用籃狀菌液體菌膜發酵生產甜菜苷的方法，其特征在于：步驟（2）中所述甜菜苷的產量最高達到7.2g/L。