[發(fā)明專(zhuān)利]檢測(cè)遠(yuǎn)志中sibiricose A5

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710495176.2
• 申請(qǐng)日: 2017-06-26
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107254528B
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-06-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張福生;王丹丹;閆艷;張建琴;秦雪梅;張麗增
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 山西大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C12Q1/6895
• 分類(lèi)號(hào): C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 山西五維專(zhuān)利事務(wù)所(有限公司) 14105
• 代理人: 張福增

本發(fā)明公開(kāi)一種檢測(cè)遠(yuǎn)志藥材中sibiricose A₅與sibiricose A₆含量的PCR引物及方法，該P(yáng)CR引物為：上游引物：5’?AGATGGTGAGCGTGATT?3’；下游引物：5’?CAAGCCCTCTTTCAATA?3’。該方法包括：提取遠(yuǎn)志樣品的基因組DNA；以基因組DNA為模板，利用該特異性引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增；通過(guò)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物檢測(cè)其所含化合物sibiricose A₅與sibiricose A₆的含量，能擴(kuò)增出長(zhǎng)度為629bp條帶的遠(yuǎn)志樣品，其所含化合物sibiricose A₅與sibiricose A₆的含量較低。本發(fā)明所述PCR引物及方法，具有方便快捷、準(zhǔn)確性高的優(yōu)點(diǎn)，在遠(yuǎn)志藥材的良種選育中應(yīng)用，可大大縮短育種時(shí)間，提高育種效率。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于分子生物學(xué)領(lǐng)域，尤其涉及一種檢測(cè)遠(yuǎn)志藥材中化合物sibiricoseA₅與 sibiricose A₆含量高低的PCR引物及方法。

背景技術(shù)

遠(yuǎn)志(Polygala tenuifolia Willd.)始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為上品，且為常用中藥。性溫，味苦、辛，具有安神益智、祛痰消腫等功效。經(jīng)現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)，遠(yuǎn)志藥材的主要有效成分包括皂苷類(lèi)、糖酯類(lèi)、口山酮類(lèi)及生物堿類(lèi)等，具有抑菌、抗炎、提高認(rèn)知、改善記憶能力、抗老年癡呆、抗抑郁、抗腫瘤、抗衰老等藥理作用。

中藥材藥效的強(qiáng)弱與藥材質(zhì)量的優(yōu)劣密切相關(guān)，而藥材質(zhì)量的優(yōu)劣與藥材中所含主要化學(xué)成分含量的高低緊密相關(guān)。研究表明，糖酯類(lèi)化合物sibiricose A₅與sibiricoseA₆具有較強(qiáng)的抗癡呆及抗抑郁活性。目前對(duì)化合物sibiricose A₅與sibiricose A₆的定性及定量分析，主要集中于提取分離、HPLC(UPLC)含量測(cè)定、指紋圖譜、一測(cè)多評(píng)或代謝組學(xué)等方法，但這些方法存在著諸多不足：提取分離具有極大的盲目性，耗時(shí)長(zhǎng)，同時(shí)還不可避免的涉及到大量的重復(fù)性工作；HPLC(UPLC)含量測(cè)定、指紋圖譜、一測(cè)多評(píng)或代謝組學(xué)等方法，所用儀器比較昂貴，對(duì)實(shí)驗(yàn)操作人員的技術(shù)要求較高，難以普遍推廣應(yīng)用。中藥材中次生代謝物的累積程度及含量變化又受生長(zhǎng)年限的影響，中藥材尤其是根莖類(lèi)中藥材，生長(zhǎng)年限較長(zhǎng)，一般以2-3年生為主，測(cè)定中藥材中所含化合物的含量需要較長(zhǎng)時(shí)間。

化合物含量是多基因控制的復(fù)雜性狀，不同遠(yuǎn)志樣品間化合物含量差異較大。sibiricose A₅與sibiricose A₆具有相同的母核結(jié)構(gòu)，其含量可能受同一類(lèi)型或同一個(gè)基因控制。故本發(fā)明篩選出與sibiricose A₅與sibiricose A₆含量相關(guān)的特異性DNA分子條帶，目的是針對(duì)該特異性條帶設(shè)計(jì)出可檢測(cè)sibiricose A₅與sibiricose A₆含量高低的特異性PCR引物，并希望得到實(shí)際應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種可檢測(cè)遠(yuǎn)志藥材中sibiricose A₅與sibiricose A₆含量高低的PCR 引物；以及利用該P(yáng)CR引物檢測(cè)遠(yuǎn)志藥材中sibiricose A₅與sibiricose A₆含量高低的方法。該方法具有方便快捷、準(zhǔn)確性好的優(yōu)點(diǎn)，可在遠(yuǎn)志藥材的良種選育中應(yīng)用，可大大縮短育種時(shí)間，提高育種效率。

本發(fā)明提供的一種檢測(cè)遠(yuǎn)志藥材中sibiricose A₅與sibiricose A₆含量的PCR引物，該特異性PCR引物如下所示：

上游引物：5’-AGATGGTGAGCGTGATT-3’(SEQ ID No.1)；