[發明專利]檢測DNA甲基化鑒別同卵雙生子的試劑盒及方法

有效

• 申請號: 201710487933.1
• 申請日: 2017-06-23
• 公開（公告）號: CN107236808B
• 公開（公告）日: 2019-12-03
• 發明（設計）人: 李淑瑾;叢斌;付光平;徐潔;張倩;杜情情
• 申請（專利權）人: 河北醫科大學
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/6869
• 代理公司: 13120 石家莊國為知識產權事務所
• 代理人: 王麗巧<國際申請>=<國際公布>=<進入

本發明涉及分子生物學領域，具體公開了檢測DNA甲基化鑒別同卵雙生子的試劑盒及方法。本發明提供的試劑盒，包括：血液DNA提取試劑盒、DNA甲基化轉化試劑盒、PCR緩沖溶液、引物、焦磷酸測序試劑盒、磁珠、結合緩沖液、洗滌緩沖液、退火緩沖液和變性緩沖液；所述引物包括分別對應靶序列IGS3、IGS4、IGS5和IGS6，用于PCR擴增的上下游引物和測序引物；采用所述試劑鑒別同卵雙生子的方法，可對同卵雙生子進行鑒別，有效提高區分同卵雙生子的能力，為同卵雙生子犯罪案件的偵破提供技術支持。

技術領域

本發明屬于分子生物學領域，具體涉及檢測DNA甲基化鑒別同卵雙生子的試劑盒及方法。

背景技術

目前短串聯重復序列分型是法醫學廣泛采用的分型技術，單核苷酸多態性是近些年來應用于法醫領域的遺傳標記，它對于處理降解檢材，以及推測嫌疑 人個性特征有一定的優勢。目前利用法醫的常規技術手段能夠解決案件中大多數同一認定和親子關系鑒定問題，但對于同卵雙胞胎仍然很難進行區分。由于同卵雙生子是從同一個受精卵發育而來，他們擁有相同的DNA序列，這就給涉及同卵雙胞胎的犯罪案件的偵破帶來很大的困難。英國的樸次茅斯市發生的汽車盜竊案，在被盜汽車上采集到嫌疑人DNA，經調查發現有一對同卵雙胞胎都擁有這份DNA數據，這就無法認定真正的盜竊者。法國馬賽地區發生的多次強奸案，警方通過監控鎖定了一名送貨司機，但最終查出的嫌犯是一對同卵雙胞胎兄弟，由于應用現有的技術無法區分這對兄弟，也只好把兩人無罪釋放。同卵雙胞胎違法犯罪事件同樣在國內也有發生，陜西省岐山縣公安局受理的一起強奸殺人案，DNA證據直指鄰家一對同卵雙胞胎，由于他們具有相同的DNA分型，從而給案件的偵破帶來了很大的困難。因此，應用分子生物學的方法對同卵雙生子進行鑒別，對案件的偵破將起到很大的作用。

發明內容

針對同卵雙生子之間有著相同或極其相似的基因序列，難以區分的問題，提供檢測DNA甲基化鑒別同卵雙生子的試劑盒及方法。

為解決上述技術問題，本發明所采取的技術方案是：

檢測DNA甲基化鑒別同卵雙生子的試劑盒，包括：血液DNA提取試劑盒、DNA甲基化轉化試劑盒、PCR緩沖溶液、引物、焦磷酸測序試劑盒、磁珠、結合緩沖液、洗滌緩沖液、退火緩沖液和變性緩沖液；所述引物包括分別對應靶序列IGS3、IGS4、IGS5和IGS6，用于PCR擴增的上下游引物和測序引物：

（1）對于IGS3靶序列：

上游引物：5’- AGAGGGTTATTTGAGTTTAGTTTTTT -3’，

下游引物：5’-biotin- AAAATTTACAAATTTCCAATCTACTATCC-3’，

測序引物：5’- TTTTTTTTTTAATTTTGTAATGAGT -3’；

（2）對于IGS4靶序列：

上游引物：5’- GTTTTTGGTAGGAAGAGGGAAAAAT -3’，

下游引物：5’-biotin- ATTAACCAAAATAATCTTAATCACCTAAC-3’，

測序引物：5’- AGGAAGAGGGAAAAATAATTA -3’；

（3）對于IGS5靶序列：

上游引物：5’- GTTTTTGATAGGGTTGGTTTGTATTG -3’，

下游引物：5’-biotin-CCACTAAAAAAAACAAAAACAACCTAATTA -3’，

測序引物：5’- GGTTGGTTTGTATTGG -3’；

（4）對于IGS6靶序列：