[發(fā)明專利]一種基于適配體修飾納米金比色檢測(cè)玉米赤霉烯酮的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710487619.3
• 申請(qǐng)日: 2017-06-23
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107389665B
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-06-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王周平;韋麗婷;趙旭;吳世嘉;段諾;馬小媛
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 江南大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N21/76
• 分類號(hào): G01N21/76
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• 代理人: 暫無(wú)信息

本發(fā)明涉及一種基于適配體修飾納米金比色檢測(cè)玉米赤霉烯酮的方法，將巰基化玉米赤霉烯酮適配體DNA1和巰基化適配體的互補(bǔ)鏈DNA2分別與13±2nm納米金連接形成適配體?納米金探針和互補(bǔ)鏈?納米金探針，通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)法進(jìn)行玉米赤霉烯酮的可視化檢測(cè)。當(dāng)待測(cè)物中含有靶標(biāo)時(shí)，靶標(biāo)與適配體結(jié)合，使適配體?納米金探針和互補(bǔ)鏈?納米金探針呈游離狀態(tài)，在高鹽濃度下，納米金容易發(fā)生聚集，顏色由紅色變成藍(lán)色；當(dāng)待測(cè)物中不含靶標(biāo)時(shí)，適配體與其互補(bǔ)鏈堿基互補(bǔ)配對(duì)結(jié)合，使適配體?納米金探針和互補(bǔ)鏈?納米金探針呈穩(wěn)定的網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)，在高鹽濃度下，納米金不發(fā)生聚集，顏色仍為紅色。隨著靶標(biāo)濃度的增大，納米金顏色由紅色逐漸變?yōu)樗{(lán)色，通過(guò)測(cè)定溶液在200～800nm的紫外?可見(jiàn)光譜，即可實(shí)現(xiàn)對(duì)待測(cè)物中玉米赤霉烯酮的定量檢測(cè)。

技術(shù)領(lǐng)域

一種基于納米金比色檢測(cè)玉米赤霉烯酮的方法，涉及納米材料和分子生物學(xué)領(lǐng)域，用于食品安全的檢測(cè)。

背景技術(shù)

玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEN)又稱為F2毒素，是一種非甾體類雌激素樣活性的真菌毒素，其分子式為C₁₈H₂₂O₅，白色晶體，是一種酚的二羥基苯酸的內(nèi)酯結(jié)構(gòu)，不溶于水、二硫化碳和四氧化碳，易溶于甲醇、乙醇、乙醚及苯等有機(jī)溶劑。ZEN是由禾谷鐮刀菌等菌種產(chǎn)生的有毒代謝產(chǎn)物，其主要衍生物為α-玉米赤霉烯醇和β-玉米赤霉烯醇。

ZEN主要污染玉米、高粱、小麥、大米、小米和燕麥等谷物及其制品，具有較強(qiáng)的生殖毒性、免疫毒性、肝毒性和致畸作用，食用被ZEN污染的食物可引起中樞神經(jīng)系統(tǒng)中毒，出現(xiàn)惡心、發(fā)冷、頭痛、升至抑郁和共濟(jì)失調(diào)等癥狀，妊娠期的動(dòng)物(包括人)食用，還會(huì)引起流產(chǎn)、死胎和畸胎，對(duì)我們?nèi)祟惡托竽翗I(yè)的發(fā)展帶來(lái)巨大危害。因此，我國(guó)對(duì)食品、谷物飼料中ZEN含量都有嚴(yán)格的標(biāo)準(zhǔn)，我國(guó)GB5009.209-2016規(guī)定糧食和糧食制品中ZEN的檢出限為5μg/kg，酒類中ZEN的檢出限為20μg/kg，醬油、醋、醬及醬制品中ZEN的檢出限為50μg/kg，大豆、油菜籽、食用植物油中ZEN的檢出限為10μg/kg。GB13078.2-2006規(guī)定飼料和玉米中ZEN的允許量為500μg/kg。

目前，用于檢測(cè)食品和飼料中ZEN含量的方法主要有薄層色譜法(TLC)、氣相色譜法(GC)、高效液相色譜法(HPLC)、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(LC-MS)和酶聯(lián)免疫法(ELISA)，這些方法各有其優(yōu)缺點(diǎn)，如操作復(fù)雜、需要昂貴的儀器和專業(yè)的操作人員、穩(wěn)定性差等問(wèn)題，不適用于現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)。因此，發(fā)明一種操作簡(jiǎn)單、成本低、特異性強(qiáng)、靈敏度高、檢測(cè)時(shí)間短的玉米赤霉烯酮檢測(cè)方法具有重要的意義。納米金具有非常獨(dú)特的光學(xué)特性，當(dāng)金納米顆粒間的距離拉近時(shí)，會(huì)引起納米金顏色的變化。核酸適配體是通過(guò)指數(shù)富集系統(tǒng)進(jìn)化技術(shù)從體外篩選得到的，能與相應(yīng)靶物質(zhì)特異性結(jié)合的一類單鏈寡核苷酸序列。與抗體相比，適配體具有易人工合成和修飾，靶物質(zhì)范圍廣，穩(wěn)定性好，分子量小和易保存等優(yōu)點(diǎn)。本發(fā)明利用納米金的光學(xué)特性和適配體的高特異性、靈敏性，對(duì)玉米赤霉烯酮的檢測(cè)限為0.1ng/ml,在0.1～1000ng/ml范圍內(nèi)線性良好(R²＝0.99617)，檢測(cè)可在1h內(nèi)完成，實(shí)現(xiàn)玉米赤霉烯酮的快速可視化檢測(cè)。

發(fā)明內(nèi)容：

本發(fā)明的目的是提供一種靈敏度高的基于適配體修飾納米金形成探針捕獲玉米赤霉烯酮，結(jié)合納米金的光學(xué)特性進(jìn)行比色的快速檢測(cè)玉米赤霉烯酮的可視化方法。

為解決以上技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明采取如下技術(shù)方案：