[發明專利]一種用于快速檢測21種點突變β地中海貧血等位基因的芯片、擴增試劑及試劑盒在審

申請號：	201710484676.6	申請日：	2017-06-23
公開（公告）號：	CN109112198A	公開（公告）日：	2019-01-01
發明（設計）人：	陳治中;卿吉琳	申請（專利權）人：	陳治中
主分類號：	C12Q1/6883	分類號：	C12Q1/6883;C12N15/11
代理公司：	北京海虹嘉誠知識產權代理有限公司 11129	代理人：	吳泳歷
地址：	530012 廣西壯***	國省代碼：	廣西;45
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摘要：
搜索關鍵詞：	探針地中海貧血等位基因快速檢測擴增試劑點突變試劑盒芯片生物素標記引物分子診斷技術反向點雜交特異性引物氨基標記基因芯片擴增引物探針固定位點設計質控探針多重PCR 基因型顯色盒基底擴增判讀突變雜交診斷檢測保證
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【權利要求書】：

1.一種用于快速檢測21種點突變β-地中海貧血等位基因的芯片，其特征在于，所述芯片上固定有：

檢測β-地中海貧血基因所對應的正常與突變等位基因位點的特異性寡核苷酸探針，其堿基序列如SEQ ID NO：1-32。

2.根據權利要求1所述的芯片，其特征在于，所述芯片上還固定有

陽性對照探針，其堿基序列如SEQ ID NO：33-34

陰性對照探針，其堿基序列如SEQ ID NO：35

顯色體系控制探針，其堿基序列如SEQ ID NO：36。

3.根據權利要求1或2所述的芯片，其特征在于，所述芯片的基底材料選自：硝酸纖維素、醋酸纖維素、玻璃片、硅膠晶片、尼龍膜、聚丙烯膜和微縮磁珠組成的組。

4.一種用于快速檢測21種點突變β地中海貧血等位基因的擴增試劑，其特征在于：包括如下核苷酸序列的引物組，其擴增的特征序列與權利要求1-3任一所述的基因芯片中的用于檢測β-地中海貧血基因所對應的正常與突變等位基因位點的特異性寡核苷酸探針特異性結合：

B1F：SEQ ID NO：37；

B1R：SEQ ID NO：38；

B2F：SEQ ID NO：39；

B2R：SEQ ID NO：40，

所述擴增試劑中加入其它PCR擴增組分，通過一次PCR反應對待測樣品或提取自待測樣品的DNA直接進行β地中海貧血等位基因的檢測，所述待測樣品選自新鮮采集的抗凝外周血、-20℃－-80℃保存未反復凍融的陳舊性抗凝外周血、培養羊水細胞、絨毛、羊水、臍帶血、末梢血、DBS樣本和/或類似DBS處理的樣本、唾液、胚胎的遺傳物質包括配子如精子或卵子、卵裂期胚胎的卵裂球、囊胚滋養外胚層細胞，即囊胚細胞、多個細胞或單個細胞等。

5.根據權利要求4所述的PCR擴增試劑，其特征在于，用于一個反應的所述PCR擴增試劑中，含有：

6.根據權利要求4或5所述的擴增試劑，其特征在于，所述引物組中各引物摩爾濃度比例為：

優選地，用于一個反應的所述PCR擴增試劑中，含有：

使用時，添加無菌蒸餾水與待測樣品或提取自待測樣品的DNA以達到20份體積。

7.根據權利要求4-6任一所述的擴增試劑，其特征在于，所述引物的5′端標記有標記物，用于使擴增的條帶帶有所述標記物。

8.一種快速檢測21種點突變β-地中海貧血等位基因的試劑盒，其特征在于，包含權利要求1-3任一所述的芯片；

權利要求4-6任一所述的擴增試劑。

9.權利要求1-3任一所述的芯片的制備方法，步驟如下：

(1)配制探針工作液：將合成好的特異性探針稀釋成10μM的工作液，以備點樣用；

(2)固定探針：尼龍膜浸泡于10％的EDAC溶液中活化30分鐘，純水洗滌后室溫晾干；在活化處理好的尼龍膜上點上所述工作液，每滴0.5μL；點膜結束后，將膜放置于室溫進行反應；

(3)制備基因芯片：利用氫氧化鈉停止反應，制得基因芯片；

其中，所述特異性探針包括用于檢測β-地中海貧血基因所對應的正常與突變等位基因位點的特異性寡核苷酸探針，其堿基序列如SEQ ID NO：1-30所示。