[發(fā)明專利]用于等離子體金芯片的蛋白點樣緩沖液

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710482189.6
• 申請日: 2017-06-22
• 公開（公告）號: CN107167613B
• 公開（公告）日: 2018-10-02
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王國新;廖滔;陳敏文;唐梅杰;趙肅
• 申請（專利權(quán)）人: 深圳清華大學(xué)研究院;深圳無微華斯生物科技有限公司;納邁達斯生物科技中心
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/531
• 代理公司: 北京清亦華知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11201
• 代理人: 趙天月

本發(fā)明公開了用于等離子體金芯片的蛋白點樣緩沖液，該蛋白點樣緩沖液包含海藻糖、甘氨酸、異亮氨酸、硫酸銨和檸檬酸鈉。本發(fā)明用于等離子體金芯片的蛋白點樣緩沖液能夠在較長時間內(nèi)保持被固定蛋白的生物活性、縮短點樣后的孵育時間、提高蛋白在芯片上的固定能力。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體而言，涉及用于等離子體金芯片的蛋白點樣緩沖液。

背景技術(shù)

等離子體材料通常指的是貴金屬(例如金)及其復(fù)合物，其在特定波長范圍內(nèi)的光照下具有獨特的表面等離子體共振效應(yīng)。因為具有特定的結(jié)構(gòu)和表面化學(xué)性質(zhì)，這種等離子體材料在近紅外區(qū)(NIR-FE，650-1700nm)具有熒光增強效應(yīng)，通過微量點樣技術(shù)在這種材料上固定特定的蛋白(抗體或抗原)，可實現(xiàn)生物標志物的檢測。

目前，臨床領(lǐng)域應(yīng)用的免疫檢測方主要有免疫比濁、免疫層析、酶聯(lián)免疫(Elisa)、化學(xué)發(fā)光免疫分析(CLIA)，以及近些年發(fā)展應(yīng)用的蛋白芯片-免疫熒光法。由于微量生物活性物質(zhì)(如抗原或抗體)固定到芯片上后很容易喪失活性，蛋白芯片法都涉及到一項關(guān)鍵的技術(shù)，即保持蛋白芯片的穩(wěn)定性。因此，研究如何保持蛋白芯片的穩(wěn)定性具有十分重要的意義。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明旨在至少在一定程度上解決相關(guān)技術(shù)中的技術(shù)問題之一。為此，本發(fā)明的一個目的在于提出用于等離子體金芯片的蛋白點樣緩沖液，該緩沖液能夠在較長時間內(nèi)保持被固定蛋白的生物活性、縮短點樣后的孵育時間、提高蛋白在芯片上的固定能力。

本發(fā)明是基于以下發(fā)現(xiàn)提出的：目前常用的等離子體金芯片蛋白點樣緩沖液是甘油或磷酸鹽緩沖液，這類緩沖液只能對芯片上的蛋白質(zhì)起保濕作用，短時間內(nèi)防止因過度干燥而引起的蛋白質(zhì)失活，并不能長期有效地保持其生物活性。保持芯片上蛋白質(zhì)活性的方法通常是將芯片長期保存在-20℃以下的環(huán)境中，并且不能凍融，而在2-8℃冰箱存放一周或37℃破壞一天，其生物活性就損失了50％以上。此外，用常規(guī)方法點樣時，蛋白質(zhì)需要孵育12～24h才能固定到芯片上。發(fā)明人意外發(fā)現(xiàn)，通過采用海藻糖、甘氨酸、異亮氨酸、硫酸銨和檸檬酸鈉配置得到的蛋白點樣緩沖液，可以有效解決相關(guān)技術(shù)中存在蛋白質(zhì)在芯片上的固定能力差，并且被固定的蛋白質(zhì)容易喪失活性的問題。

由此，根據(jù)本發(fā)明的一個方面，本發(fā)明提出了一種用于等離子體金芯片的蛋白點樣緩沖液，所述蛋白點樣緩沖液包含海藻糖、甘氨酸、異亮氨酸、硫酸銨和檸檬酸鈉。

本發(fā)明用于等離子體金芯片的蛋白點樣緩沖液包含海藻糖、甘氨酸、異亮氨酸、硫酸銨和檸檬酸鈉。該緩沖液與目前常用甘油或磷酸鹽緩沖液相比，不僅能使蛋白與芯片基底的結(jié)合更牢固，還能減少點樣后的孵育時間，并在較長時間內(nèi)保持被固定蛋白的生物活性。

在本發(fā)明的一些實施例中，所述蛋白點樣緩沖液中所述海藻糖的濃度為10-20g/L，所述甘氨酸的濃度為5-10g/L，所述異亮氨酸的濃度為5-10g/L，所述硫酸銨的濃度為0.2-1mol/L，所述檸檬酸鈉的濃度為0.05-0.2mol/L。由此，可以進一步提高蛋白在芯片上的固定能力、減少點樣后的孵育時間并在較長時間內(nèi)保持被固定蛋白的生物活性。

在本發(fā)明的一些實施例中，所述蛋白點樣緩沖液中所述海藻糖的濃度為10g/L，所述甘氨酸的濃度為5g/L，所述異亮氨酸的濃度為5g/L，所述硫酸銨的濃度為0.2mol/L，所述檸檬酸鈉的濃度為0.05mol/L。由此，可以進一步提高蛋白在芯片上的固定能力、減少點樣后的孵育時間并在較長時間內(nèi)保持被固定蛋白的生物活性。

在本發(fā)明的一些實施例中，所述蛋白點樣緩沖液的pH值為6.0-7.2。

在本發(fā)明的一些實施例中，所述蛋白點樣緩沖液的pH值為6.0。

在本發(fā)明的一些實施例中，所述蛋白點樣緩沖液的pH值是通過加入氫氧化鈉溶液和/或鹽酸溶液調(diào)節(jié)獲得的。由此，可以有效調(diào)節(jié)蛋白點樣緩沖液的pH。