[發明專利]用于大豆體細胞胚狀體持續增殖和繼代保存的培養方法

在審

• 申請號: 201710479014.X
• 申請日: 2017-06-09
• 公開（公告）號: CN107182786A
• 公開（公告）日: 2017-09-22
• 發明（設計）人: 楊向東;楊靜;趙倩倩;邢國杰;牛陸;郭東全;賀紅利;錢雪燕;姚瑤
• 申請（專利權）人: 吉林省農業科學院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00;C12N5/04
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種用于大豆體細胞胚狀體持續增殖和繼代保存的培養方法，包括如下步驟：

(1)取開花后15-20天的大豆未成熟子葉接種于誘導培養基，于黑暗條件下培養6-8周后，在外植體周圍誘導產生成簇、黃綠色的球形體細胞胚狀體；

(2)將球形胚狀體轉接至增殖培養基中培養，培養條件為400-1000Lux低光照強度，光周期為16小時光/8小時暗交替，培養溫度25±1℃，每2-3周換一次增殖培養基，連續繼代培養3年以上。

2.根據權利要求1所述的用于大豆體細胞胚狀體持續增殖和繼代保存的培養方法，其特征在于：所述誘導培養基包括以下成分：1×MS鹽、1×B5有機、2，4-D 40mg/L、蔗糖60g/L、瓊脂8g/L，pH 5.7。

3.根據權利要求1所述的用于大豆體細胞胚狀體持續增殖和繼代保存的培養方法，其特征在于：所述增殖培養基包含以下成分：1×改良MS鹽、1×B5有機，天門冬酰胺670-750mg/L、2，4-D 10-20mg/L、蔗糖10-30g/L、植物凝膠3-5g/L，PH 5.7-6.2。

4.根據權利要求3所述的用于大豆體細胞胚狀體持續增殖和繼代保存的培養方法，其特征在于：所述1×改良MS鹽包含以下成分：

硫酸銨(NH₄)₂SO₄：463mg/L

硝酸鉀KNO₃：2830mg/L

磷酸二氫鉀KH₂PO₄：170mg/L

硫酸鎂MgSO₄·7H₂O：370mg/L

氯化鈣CaCl₂·2H₂O：440mg/L

乙二胺四乙酸二鈉Na₂EDTA：37.24mg/L

硫酸亞鐵FeSO₄·7H₂O：27.84mg/L

硫酸錳MnSO₄·H₂O：16.9mg/L

硫酸鋅ZnSO₄·H₂O：8.6mg/L

硫酸銅CuSO₄·7H₂O：0.025mg/L

碘化鉀Kl：0.83mg/L

氯化鈷CoCl₂·6H₂O：0.025mg/L

硼酸H₃BO₃：6.2mg/L

鉬酸鈉Na₂MoO₄·2H₂O：0.25mg/L。

5.根據權利要求2或3所述的用于大豆體細胞胚狀體持續增殖和繼代保存的培養方法，其特征在于：所述1×B5有機包含以下成分：

肌醇myo-inositol：100mg/L

煙酸nicotinic acid：1mg/L

鹽酸吡哆醇pyridoxine-HCl：1mg/L

鹽酸硫胺素thiamine-HCl：10mg/L。