[發明專利]糖化血紅蛋白在線溶血酶法檢測試劑盒

在審

• 申請號: 201710478533.4
• 申請日: 2017-06-22
• 公開（公告）號: CN107164456A
• 公開（公告）日: 2017-09-15
• 發明（設計）人: 鄒炳德;鄒繼華;賈江花;何才郎
• 申請（專利權）人: 美康生物科技股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/37
• 分類號: C12Q1/37;C12Q1/28;C12Q1/26
• 代理公司: 寧波市鄞州甬致專利代理事務所(普通合伙)33228
• 代理人: 沈春紅

技術領域

本發明涉及生物制劑技術領域，具體涉及一種糖化血紅蛋白在線溶血酶法檢測試劑盒。

背景技術

世界衛生組織估計，全世界有1.8億人患有糖尿病。糖化血紅蛋白(糖化Hb)對于糖尿病患者來說是一個非常重要的檢查指標。HbA1c為Hb的β鏈N末端的α氨基被糖化的糖化Hb，在糖化Hb中，也被作為糖尿病診斷等的特別重要的指標。目前，HbA1c的測定方法主要有離子交換層析法、高效液相色譜法、親和層析法、放射免疫法、酶免疫法和膠乳免疫凝集法等，以上方法或是需專業的昂貴設備、或是檢測準確度、抗干擾性、速度等尚不理想，一定程度上限制了其在臨床上的大規模應用。

新開發的糖化血紅蛋白酶法檢測試劑盒利用了氧化還原反應，克服了上述幾種方法的靈敏度較低、重復性差、耗時難以大量檢測等缺點，具有檢測靈敏度高、反應產物無污染且抗干擾能力強等優點；該糖化血紅蛋白酶法檢測試劑盒具體操作為：從患者采集EDTA抗凝新鮮全血，進行紅細胞的自然沉降，然后加入到250uL試劑盒的溶血緩沖液中，室溫溶血10分鐘；將得到的25ul溶血試樣與112uL試劑R1a和48uL試劑R1b混合，于37℃溫浴3分鐘，讀取吸光度A1。再向反應體系中加入70uL試劑2，于37℃溫浴2分鐘，讀取吸光度A2。ΔA＝A2-A1。測定時可選擇751nm和571nm處的吸光值。其中，Hb濃度可由波長751nm處的吸光度求出，HbA1c濃度可由波長571nm處的吸光度求出。

但是，上述的試劑盒由于糖化血紅蛋白是人體血液中紅細胞內的血紅蛋白與血糖結合的產物,因此需要溶解紅細胞以釋放糖化血紅蛋白，現有技術的方案多是采用的多少單獨先設置一個溶血試劑進行溶血，然后再進行后續的其它檢測步驟；但是這一溶血過程需要一定的時間,因此仍存在樣本需要手工溶血，溶血時間長，樣本量大，不適合POCT檢測等一些待改進地方；此外，現有的糖化血紅蛋白酶法檢測試劑盒在檢測過程需要將紅細胞沉降回收起到一個富集的效果，而且樣本需求量比較大，試劑盒結構的不合理導致的這一耗時、繁瑣的過程，不適合現有POCT檢測的快速、簡便的檢測需求。

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術的上述不足，提供一種糖化血紅蛋白在線溶血酶法檢測試劑盒，該試劑盒創造性地采用三試劑組成結構，該結構的試劑盒具有無需手工溶血，溶血時間短，樣本量小，適合POCT檢測的優點。

為了解決上述技術問題，本發明采用的技術方案為：一種糖化血紅蛋白在線溶血酶法檢測試劑盒，該試劑盒由試劑R1、試劑R2、試劑R3組成，其中：

試劑R1為：

10-1000mmol/L嗎啉代丙烷磺酸(3-(N-嗎啉)丙磺酸)，

10-1000mmol/L N-環乙基-2氨基乙烷磺酸，

1-200g/L聚氧乙烯十二烷基醚(十二烷基聚氧乙烯醚)，

100-10000kU/L金屬蛋白酶(在試劑R1a中)，

0.1-10mmol/L 2-(碘苯基)-3-(2，4-二硝基苯)-5-(2，4-二磺苯基)-2H四唑鈉鹽；

試劑R2為：0.1-10mmol/L嗎啉代乙基磺酸，

0.5-50mmol/L CaCl2；

試劑R3為：10-1000mmol/L Tris-HCl，

1-150kU/L高活性果糖纈氨酸氧化酶，

30-600kU/L過氧化物酶，

0.01-0.5mmol/L N-(羧甲基氨羰基)-4，4雙偶(二甲胺)-二苯胺鈉鹽。

作為進一步優選，本發明試劑盒的組成如下：

試劑R1為：10-900mmol/L嗎啉代丙烷磺酸，

10-900mmol/L N-環乙基-2氨基乙烷磺酸，

1-150g/L聚氧乙烯十二烷基醚，

100-8000kU/L金屬蛋白酶，

0.5-10mmol/L 2-(碘苯基)-3-(2，4-二硝基苯)-5-(2，4-二磺苯基)-2H四唑鈉鹽；

試劑R2為：0.5-10mmol/L嗎啉代乙基磺酸，

0.5-40mmol/L CaCl₂；

試劑R3為：10-1000mmol/L Tris-HCl，

1-100kU/L高活性果糖纈氨酸氧化酶，

30-500kU/L過氧化物酶，

0.05-0.5mmol/L N-(羧甲基氨羰基)-4，4雙偶(二甲胺)-二苯胺鈉鹽；