[發明專利]一種用于檢測染色體拷貝數變異的測序文庫構建方法和試劑盒

在審

• 申請號: 201710476884.1
• 申請日: 2017-06-21
• 公開（公告）號: CN107217308A
• 公開（公告）日: 2017-09-29
• 發明（設計）人: 商玲;呂萌;陳祥彬;王婷婷;張建光
• 申請（專利權）人: 北京貝瑞和康生物技術股份有限公司
• 主分類號: C40B50/06
• 分類號: C40B50/06;C12Q1/68
• 代理公司: 北京市金杜律師事務所11256
• 代理人: 孟凡宏,王月

1.一種用于檢測染色體拷貝數變異的高通量測序文庫的快速構建方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)利用雙鏈DNA片段化酶將待測DNA隨機片段化；

(2)對片段化后的DNA進行末端補平和3’端懸A；

(3)將末端補平并3’端懸A的DNA與測序接頭連接，獲得連接產物；

(4)純化所述連接產物，獲得測序文庫，

其中步驟(1)-(3)在單一反應管中完成。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(1)-(3)之間不包含DNA純化步驟。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，不包含PCR擴增步驟。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，在步驟(1)和(2)之間還包括將所述雙鏈DNA片段化酶滅活的步驟。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的雙鏈DNA片段化酶為非特異性切口核酸酶和T7內切酶突變體的混合酶。

6.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述非特異性切口核酸酶是Vvn核酸酶，所述T7內切酶突變體是在兩個催化結構域之間的橋接區具有突變的T7內切酶。

7.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(2)采用T4DNA聚合酶和Taq酶進行。

8.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述測序接頭為與測序平臺匹配的雙鏈的測序接頭。

9.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(3)采用T4DNA連接酶進行。

10.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述測序文庫適用于第二代高通量測序平臺。

11.一種用于構建檢測染色體拷貝數變異的測序文庫的試劑盒，其特征在于，包含：用于將DNA片段化的雙鏈DNA片段化酶和緩沖液I、用于滅活雙鏈DNA片段化酶的緩沖液II、用于DNA末端補平的酶和用于3’端懸A的酶、測序接頭、連接酶和用于連接的緩沖液III。

12.根據權利要求11所述的試劑盒，其特征在于，所述雙鏈DNA片段化酶為非特異性切口核酸酶和T7內切酶突變體的混合酶。

13.根據權利要求12所述的試劑盒，其特征在于，所述非特異性切口核酸酶是Vvn核酸酶，所述T7內切酶突變體是在兩個催化結構域之間的橋接區具有突變的T7內切酶。

14.根據權利要求11所述的試劑盒，其特征在于，所述用于DNA末端補平的酶是T4DNA聚合酶，用于3’端懸A的酶是Taq酶。

15.根據權利要求11所述的試劑盒，其特征在于，所述測序接頭為與測序平臺匹配的雙鏈的測序接頭。

16.根據權利要求11所述的試劑盒，其特征在于，所述連接酶是T4DNA連接酶。