[發(fā)明專利]高效合成融合基因的方法及其應用在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201710476786.8 | 申請日： | 2017-06-21 |
| 公開（公告）號： | CN107287190A | 公開（公告）日： | 2017-10-24 |
| 發(fā)明（設計）人： | 謝昌平 | 申請（專利權(quán)）人： | 上海恩即斯生物科技有限公司 |
| 主分類號： | C12N15/10 | 分類號： | C12N15/10;C12N15/66 |
| 代理公司： | 北京酷愛智慧知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司11514 | 代理人： | 孟凡臣 |
| 地址： | 201203 上海市徐匯區(qū)自由貿(mào)易試*** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 高效 合成 融合 基因 方法 及其 應用 | ||
1.一種合成融合基因的方法，其特征在于，包括如下步驟：
S1：分析待合成融合的基因序列，確定適合進行退火的區(qū)域；
S2：在所述適合進行退火的區(qū)域中選擇合適長度的片段，進行各個片段的引物的設計與合成；
S3：混合合成的各個片段的引物，然后進行重疊PCR，將各個片段的引物拼接成，得到拼接產(chǎn)物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的合成融合基因的方法，其特征在于：
所述S1中，所述確定適合進行退火的區(qū)域是根據(jù)退火溫度確定，所述退火溫度為55℃～60℃。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的合成融合基因的方法，其特征在于：
所述S1中，所述確定適合進行退火的區(qū)域是根據(jù)Primer3、Oligo或DNAStar工具進行確定。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的合成融合基因的方法，其特征在于：
所述S2中，所述合適長度為200～800bp，且保證各片段之間的重疊區(qū)域為所述適合進行退火的區(qū)域。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的合成融合基因的方法，其特征在于：
在所述S3后，還包括S4：將所述拼接產(chǎn)物進行克隆，測序驗證序列正確性。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的合成融合基因的方法，其特征在于：
所述S3中，所述重疊PCR采用Life technologies公司的Platinum Hifi聚合酶及反應體系。
7.權(quán)利要求1-6任一項所述的合成融合基因的方法在高通量測序基因診斷中融合基因的標準品構(gòu)建中的應用。
8.權(quán)利要求1-6任一項所述的合成融合基因的方法在基因定量分析中融合基因的標準品構(gòu)建中的應用。
9.權(quán)利要求1-6任一項所述的合成融合基因的方法在工程抗體尤其是雙特異性抗體構(gòu)建中的應用。
10.權(quán)利要求1-6任一項所述的合成融合基因的方法在多個編碼序列的融合基因表達載體構(gòu)建或調(diào)控元件與編碼序列的融合基因載體構(gòu)建中的應用。
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