[發(fā)明專利]具有抑制癌細(xì)胞作用的金槍魚提取物

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710476258.2
• 申請(qǐng)日: 2017-06-21
• 公開（公告）號(hào): CN107245098A
• 公開（公告）日: 2017-10-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 周建波
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 蘭溪市沉默生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C07K14/46
• 分類號(hào): C07K14/46;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/30;C07K1/16;C12P21/06;A61P35/00
• 代理公司: 北京華仲龍騰專利代理事務(wù)所(普通合伙)11548
• 代理人: 李靜

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及保健品制備技術(shù)領(lǐng)域，具體是一種具有抑制癌細(xì)胞作用的金槍魚提取物。

背景技術(shù)

眾所周知，惡性腫瘤已成為威脅人類健康的主要疾病，其治療也成為人們關(guān)注的熱點(diǎn)之一。傳統(tǒng)的化療和放療在治療的同時(shí)，也產(chǎn)生嚴(yán)重的毒副作用。腫瘤的生物治療是繼傳統(tǒng)療法的第四種治療手段，目前的研究已證實(shí)，生物治療在腫瘤的治療中發(fā)揮著愈來愈大的作用，并有望成為攻克腫瘤的療法。

多肽從二十世紀(jì)初才開始受到關(guān)注，研究發(fā)現(xiàn)它區(qū)別于蛋白質(zhì)區(qū)別于氨基酸，具有藥物的作用。到了上個(gè)世紀(jì)九十年代才有了長足發(fā)展，在不斷更新的技術(shù)指導(dǎo)下，多肽的應(yīng)用范圍越來越廣，作用也越來越大，這才邁進(jìn)了我們的生活，在我們生活中占據(jù)的份額越來越大，多肽類藥物高效低毒特異性強(qiáng)具有區(qū)別于其他藥物的特有優(yōu)勢(shì)，正不斷影響著我們的生活。而且多肽潛力巨大，是生物科學(xué)發(fā)展的又一大突破和發(fā)展方向。

天然存在的海洋活性多肽由于在生物體中含量低，而且提取困難，難以實(shí)現(xiàn)大量生產(chǎn)供給所需，化學(xué)人工合成多肽成本昂貴。所以，人們更多地把目光投向開發(fā)蛋白酶解產(chǎn)物獲得活性多肽這條途徑上來。由于海洋生物生存的環(huán)境與陸地生物完全不同，如高壓、低溫、高溫和高鹽等極端環(huán)境，為了適應(yīng)這些極端的海洋生物環(huán)境，海洋生物蛋白質(zhì)無論氨基酸的組成還是氨基酸的序列都與陸地生物蛋白有很大的不同，同時(shí)，海洋生物蛋白資源無論在種類和數(shù)量上都遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于陸地蛋白資源，并且未得到很好的開發(fā)。種類繁多的海洋蛋白氨基酸序列中，潛在著許多具有生物活性的氨基酸序列，用特異的蛋白酶水解，就釋放出有活性的肽段。海洋生物蛋白資源是21世紀(jì)人類重要的蛋白類食物及生物活性物質(zhì)的重要來源。我國目前的海洋生物蛋白資源總量在世界各國名列前茅，但我國目前的蛋白類水產(chǎn)品中，除一部分直接食用外，大部分通過簡單的加工技術(shù)制成食品進(jìn)入市場(chǎng)，加工技術(shù)落后，產(chǎn)品結(jié)構(gòu)單一，產(chǎn)品的附加值低，使得產(chǎn)品在國際市場(chǎng)上的競爭力較差。因此，我國急需對(duì)海洋生物蛋白資源進(jìn)行優(yōu)化利用和高值化加工。

現(xiàn)有技術(shù)如授權(quán)公告號(hào)為CN103333940B的中國發(fā)明專利，公開了一種利用帶魚制備二肽基肽酶IV抑制肽的方法，步驟包括：將帶魚加水絞碎成均勻的魚肉漿；魚肉漿放入酶解罐中，添加內(nèi)切蛋白酶，攪拌水解4～12h，得水解液；升溫至95～100℃，保持10～15分鐘滅酶；將水解液冷至40～60℃，添加外切蛋白酶，攪拌水解2～8h；升溫至95～100℃，保持10～15分鐘滅酶；內(nèi)切蛋白酶為木瓜蛋白酶、Neutrase中性蛋白酶、Alcalase堿性蛋白酶中的一種。外切蛋白酶為Flavourzyme風(fēng)味蛋白酶。將上述所得滅酶后的水解液離心取上清液；將上清液加入到超濾膜分離器中，調(diào)節(jié)超濾膜的壓力為0.05～0.1MPa，超濾膜的截留分子量為3000Da，收集超濾膜透過液；采用親和層析方法分離純化DPP-IV抑制肽。海洋生物蛋白質(zhì)無論氨基酸的組成還是氨基酸的序列都與陸地生物蛋白有很大的不同，上述方法采用陸地上提取的蛋白酶對(duì)海洋生物進(jìn)行酶解，酶解效率低。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種能有效抑制癌細(xì)胞DNA的復(fù)制，使癌細(xì)胞停留在細(xì)胞分裂間期的金槍魚提取物。

本發(fā)明針對(duì)背景技術(shù)中提到的問題，采取的技術(shù)方案為：具有抑制癌細(xì)胞作用的金槍魚提取物中含有氨基酸序列為HSHACASYYCRCLVLHPCVNCYCRCSR的活性短肽。上述活性短肽可有效抑制癌細(xì)胞DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)的解旋，從而抑制癌細(xì)胞DNA的復(fù)制，使癌細(xì)胞停留在細(xì)胞分裂間期；并且能促進(jìn)E-鈣黏蛋白的分泌，降低癌細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)性，從而降低其轉(zhuǎn)移的速度。

具有抑制癌細(xì)胞作用的金槍魚提取物的制備方法，包括復(fù)合酶酶解、等電點(diǎn)沉淀、超濾和納濾、HPLC洗脫和冷凍干燥；復(fù)合酶酶解步驟為采用海洋氧化短桿菌產(chǎn)堿性蛋白酶和裙帶菜蛋白酶酶解金槍魚魚肉勻漿液，并采用超聲波輔助酶解。海洋生物蛋白質(zhì)無論氨基酸的組成還是氨基酸的序列都與陸地生物蛋白有很大的不同，海洋氧化短桿菌產(chǎn)堿性蛋白酶和裙帶菜蛋白酶同時(shí)對(duì)金槍魚蛋白進(jìn)行酶解，可得到大量有活性的肽段。

作為優(yōu)選，復(fù)合酶酶解步驟中海洋氧化短桿菌產(chǎn)堿性蛋白酶和裙帶菜蛋白酶的加入量為1~2wt%，酶解溫度為25~35℃，pH為7.0~9.0，酶解時(shí)間為50~70min。海洋生物蛋白質(zhì)無論氨基酸的組成還是氨基酸的序列都與陸地生物蛋白有很大的不同，金槍魚蛋白上有大量海洋氧化短桿菌產(chǎn)堿性蛋白酶和裙帶菜蛋白酶的酶切位點(diǎn)，酶解后可得到大量長短不同的肽鏈，酶解效率高。