[發(fā)明專利]一種表達(dá)鴨2型腺病毒fiber2基因的重組雞痘病毒轉(zhuǎn)移載體及其構(gòu)建方法和應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710471276.1
• 申請日: 2017-06-20
• 公開（公告）號: CN107475297B
• 公開（公告）日: 2020-12-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 林麗苗;周慶豐;李群輝;招麗嬋;李薇;余國蓮;杜云平
• 申請（專利權(quán)）人: 溫氏食品集團(tuán)股份有限公司
• 主分類號: C12N15/863
• 分類號: C12N15/863;C12N15/66;C12N15/34;A61K39/235;A61P31/20
• 代理公司: 廣州容大知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 44326
• 代理人: 劉新年

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，主要涉及一種表達(dá)鴨2型腺病毒(DADV2)fiber2基因的重組雞痘病毒轉(zhuǎn)移載體及其構(gòu)建方法和應(yīng)用。所述載體在pMD19T?Simple載體TA克隆位點(diǎn)插入含有雞痘病毒的早晚期啟動子LP2EP2啟動下的DADV2fiber2基因、P11啟動子啟動下的lacz基因，以及用于同源重組的雞痘病毒的基因組復(fù)制非必須片段LTYB、RTYB。所述轉(zhuǎn)移載體的構(gòu)建方法，包括如下步驟：構(gòu)建質(zhì)粒pMD?TYB；構(gòu)建質(zhì)粒pMD22；構(gòu)建質(zhì)粒pMD22?lacz；構(gòu)建中間載體pMD22?TYB?lacz；構(gòu)建轉(zhuǎn)移載體pMD22?TYB?lacz?DFB2；對所得轉(zhuǎn)移載體pMD22?TYB?lacz?DFB2進(jìn)行效果驗(yàn)證。本發(fā)明構(gòu)建的重組雞痘病毒轉(zhuǎn)移載體為研制高效的表達(dá)鴨2型腺病毒的重組雞痘病毒基因工程活載體疫苗奠定基礎(chǔ)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，主要涉及一種表達(dá)鴨2型腺病毒(DADV2)fiber2基因的重組雞痘病毒轉(zhuǎn)移載體及其構(gòu)建方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)

鴨2型腺病毒(Duck Adenovirus 2)屬于腺病毒科禽腺病毒屬，是直徑為70-90nm的線狀雙股DNA病毒，呈二十面體對稱，其核心蛋白形成直徑60-65nm的髓芯包裹在衣殼內(nèi)，衣殼由252個(gè)殼粒組成，其中有240個(gè)為六鄰體，12個(gè)則是五鄰體基底，每個(gè)基底結(jié)合著2根纖維突起，這兩個(gè)纖維突起為纖維蛋白，分別由fiber1和fiber2兩個(gè)基因編碼。纖維蛋白長度與病毒的抗原性有關(guān)，帶有腺病毒型和亞屬特異性抗原決定簇，是刺激宿主產(chǎn)生抗體的主要蛋白。其中fiber2可以誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生主要的型特異性中和抗體，對病毒的增殖、組裝或擴(kuò)散某個(gè)階段是必要的，缺少fiber2將不能產(chǎn)生病毒粒子(Pablo Guardado-Calvo，Antonio L.Llamas-Saiz，Gavin C.Fox，Patrick Langlois and Mark J.VanRaaiji.Structure of the C-terminal head domain of the fowl adenovirus type1long fiber.[J]GenVirol，2007.88:2407-2416)。

鴨2型腺病毒病1977年首次在法國番鴨發(fā)生，由J.F.Bouquet等在番鴨種分離出來(J.F.Bouquet a,Y.Moreau,J.B.McFerranT.J.Connor，1982.Isolation andcharacterisation of an adenovirus isolated from muscovy ducks,AvianPathology,11:2,301-307)。鴨2型腺病毒主要能引起15-35天齡番鴨發(fā)病死亡，感染鴨只表現(xiàn)為精神萎靡、沉郁、消瘦、軟腳、拉黃白色黏液稀糞，肝臟腫大蒼白彌漫性黃白色針尖樣壞死灶，胰腺白色壞死點(diǎn)的，脾臟腫大充血，腎臟腫大充血成黃色條索狀。近年來在廣東、浙江、福建等地番鴨、櫻桃谷鴨養(yǎng)殖場頻頻爆發(fā)直接導(dǎo)致發(fā)病死亡率可高達(dá)10％-30％不等，給我國養(yǎng)鴨業(yè)造成較大的經(jīng)濟(jì)損失。

針對鴨2型腺病毒的疾病防治，目前并沒有合適、有效的疫苗能對其進(jìn)行免疫預(yù)防。有公司自家生產(chǎn)的組織滅活苗，雖然有一定的效果，但是使用組織苗只能作為一種應(yīng)急的措施，并不能長期使用；也有公司采用細(xì)胞培養(yǎng)生產(chǎn)滅活疫苗，但效果也不佳；若是使用減毒疫苗，則會帶來其他疾病的威脅，這就使得新型疫苗的研制尤為重要。因此需要開發(fā)更加有效的針對鴨2型腺病毒的疫苗。

足見，現(xiàn)有技術(shù)還有待完善。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，有必要針對上述的問題，提供一種表達(dá)鴨2型腺病毒fiber2基因的重組雞痘病毒轉(zhuǎn)移載體及其構(gòu)建方法和應(yīng)用，為研制高效的表達(dá)鴨2型腺病毒的重組雞痘病毒基因工程活載體疫苗奠定基礎(chǔ)。

為達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：