[發(fā)明專利]半滑舌鰨GnIH基因、編碼的兩種成熟多肽及其應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710467151.1
• 申請(qǐng)日: 2017-06-19
• 公開（公告）號(hào): CN107142264A
• 公開（公告）日: 2017-09-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王濱;柳學(xué)周;徐永江;史寶;劉權(quán)
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國水產(chǎn)科學(xué)研究院黃海水產(chǎn)研究所
• 主分類號(hào): C12N15/16
• 分類號(hào): C12N15/16;C07K7/23
• 代理公司: 北京科億知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙)11350
• 代理人: 湯東鳳

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于分子生物學(xué)領(lǐng)域，具體地涉及半滑舌鰨促性腺激素抑制激素(GnIH)基因、編碼兩種成熟多肽及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

2000年，日本學(xué)者首次從鵪鶉(Coturnix japonica)腦中分離出的一種新型下丘腦十二肽，因其具有抑制垂體促性腺激素分泌的功能，故命名為促性腺激素抑制激素(GnIH)，這也是目前脊椎動(dòng)物中唯一一種生殖抑制因子。隨后，編碼GnIH前體多肽的cDNA序列在鵪鶉及其他鳥類腦中被克隆出來。GnIH前體編碼GnIH以及2個(gè)GnIH相關(guān)肽，它們C末端均為保守的Leu-Pro-X-Arg-Phe-NH2(LPXRF-a；X＝L或者Q)基序，因此GnIH及其相關(guān)肽也被稱作LPXRFa多肽。2002年，魚類GnIH同源基因首次在金魚(Carassius auratus)腦中被鑒定出來。金魚GnIH cDNA全長(zhǎng)742bp，其中開放讀框591bp，編碼197個(gè)氨基酸的前體蛋白，經(jīng)酶切加工可產(chǎn)生3種成熟肽(gfGnIH-1,-2和-3)。GnIH及其相關(guān)肽屬于RFa多肽家族，該家族C末端為Arg-Phe-NH2(RFa)基序，RFa多肽家族均參與了脊椎動(dòng)物生殖調(diào)控，介導(dǎo)了環(huán)境因子調(diào)控的生殖活動(dòng)。目前，僅在金魚等幾種魚類中鑒定出了GnIH基因，而且GnIH多肽在魚類生殖調(diào)控中的作用研究很少，且存在爭(zhēng)議。

半滑舌鰨(Cynoglossus semilaevis)是一種重要的海水養(yǎng)殖經(jīng)濟(jì)魚類，屬鰈形目(Pleuronectiformes)、舌鰨科(Cynoglossidae)、舌鰨屬(Cynoglossus)，其生長(zhǎng)速度快，經(jīng)濟(jì)價(jià)值高，洄游距離短，是理想的增殖放流和人工養(yǎng)殖種類，近年來在全國沿海形成了較大規(guī)模的養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)。半滑舌鰨雌雄個(gè)體差異較大，雌性個(gè)體的平均體長(zhǎng)約523mm，雄性個(gè)體的平均體長(zhǎng)為280mm；雄性性早熟是導(dǎo)致半滑舌鰨雌雄生長(zhǎng)差異的主要原因。GnIH作為目前脊椎動(dòng)物中唯一一種生殖抑制因子，研究GnIH在半滑舌鰨垂體LH和GH分泌中的調(diào)控作用，這對(duì)研究半滑舌鰨性早熟現(xiàn)象的分子機(jī)理具有重要意義，也為研制新型生殖調(diào)控制劑提供理論依據(jù)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題在于提供半滑舌鰨促性腺激素抑制激素基因、編碼的兩種成熟多肽及其應(yīng)用。半滑舌鰨GnIH全長(zhǎng)cDNA基因有918bp，開放閱讀框有585bp，編碼194個(gè)氨基酸前體肽。該前體肽經(jīng)過剪接后形成兩個(gè)具有功能的成熟多肽tsGnIH-1和tsGnIH-2，分別由43個(gè)氨基酸和19個(gè)氨基酸構(gòu)成，兩種成熟多肽對(duì)半滑舌鰨LH和GH分泌具有調(diào)控作用。

本發(fā)明是通過如下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的：

半滑舌鰨促性腺激素抑制激素(GnIH)基因，序列為SEQ NO.1。

本發(fā)明還提供該基因編碼的兩種成熟多肽tsGnIH-1和tsGnIH-2，所述兩種多肽的序列為SEQ NO.2和為SEQ NO.3。

本發(fā)明還提供上述兩種成熟多肽在調(diào)控半滑舌鰨促黃體生成素(LH)與生長(zhǎng)激素(GH)分泌中的應(yīng)用。

本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比的有益效果

半滑舌鰨具有重要的經(jīng)濟(jì)價(jià)值，采用常規(guī)的生物技術(shù)方法，可利用本發(fā)明的半滑舌鰨促性腺激素抑制激素(GnIH)基因和其編碼的成熟多肽，研究半滑舌鰨性別分化和性早熟的分子生物學(xué)機(jī)理，具有重要的科學(xué)意義。

附圖說明

圖1是半滑舌鰨與金魚、斑馬魚、河豚、歐洲海鱸、斜帶石斑魚、尼羅羅非魚和青鳉的促性腺激素抑制激素cDNA編碼的前體多肽序列比對(duì)。

圖2是tsGnIH-1與tsGnIH-2對(duì)半滑舌鰨LH和GH分泌的調(diào)控作用。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合附圖和實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明，但不以任何形式限制本發(fā)明。

實(shí)施例1：半滑舌鰨GnIH全長(zhǎng)cDNA序列克隆

本實(shí)施例的半滑舌鰨GnIH全長(zhǎng)基因是以半滑舌鰨腦組織總RNA反轉(zhuǎn)錄得到的cDNA為模板，經(jīng)PCR和RACE方法擴(kuò)增而得到的，它來源于半滑舌鰨腦cDNA上的促性腺激素抑制激素GnIH結(jié)構(gòu)域所對(duì)應(yīng)的基因全長(zhǎng)片段，序列如下：。