[發明專利]一種一步逆轉錄RT?qPCR人MTHFR與MTRR基因多態性表達的檢測試劑盒

在審

• 申請號: 201710463701.2
• 申請日: 2017-06-19
• 公開（公告）號: CN107236801A
• 公開（公告）日: 2017-10-10
• 發明（設計）人: 林家旺;張秋芳;崔勤;何幸
• 申請（專利權）人: 廈門金諾威生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種一步逆轉錄RT-qPCR人MTHFR與MTRR基因多態性表達的檢測試劑盒，其特征在于，包括MTHFR-C677T反應緩沖液、MTHFR-A1298C反應緩沖液、MTRR-A66G反應緩沖液、陽性對照、陰性對照、One step酶混合液。

2.根據權利要求1所述的一步逆轉錄RT-qPCR人MTHFR與MTRR基因多態性表達的檢測試劑盒，其特征在于，所述檢測試劑盒包括1支800μL MTHFR-C677T反應緩沖液、1支800μL MTHFR-A1298C反應緩沖液、1支800μL MTRR-A66G反應緩沖液、1支50μL陽性對照、1支50μL陰性對照、1支50μL One step酶混合液。

3.根據權利要求1所述的一步逆轉錄RT-qPCR人MTHFR與MTRR基因多態性表達的檢測試劑盒，其特征在于，所述MTHFR-C677T反應緩沖液包括One step RT-qPCR reaction buffer、RT增強劑、dNTPs、C677T特異性上下游引物、C677T特異性探針；

所述MTHFR-A1298C反應緩沖液包括One step RT-qPCR reaction buffer、RT增強劑、dNTPs、A1298C特異性上下游引物、A1298C特異性探針；

所述MTRR-A66G反應緩沖液包括One step RT-qPCR reaction buffer、RT增強劑、dNTPs、A66G特異性上下游引物、A66G特異性探針。

4.根據權利要求3所述的一步逆轉錄RT-qPCR人MTHFR與MTRR基因多態性表達的檢測試劑盒，其特征在于，所述C677T特異性上下游引物為MTHFR-C677T-L、MTHFR-C677T-R；所述C677T特異性探針為MTHFR-C677T-P-W、MTHFR-C677T-P-M。

5.根據權利要求3所述的一步逆轉錄RT-qPCR人MTHFR與MTRR基因多態性表達的檢測試劑盒，其特征在于，所述A1298C特異性上下游引物為MTHFR-A1298C-L、MTHFR-A1298C-R；所述A1298C特異性探針為MTHFR-A1298C-P-W、MTHFR-A1298C-P-M。

6.根據權利要求3所述的一步逆轉錄RT-qPCR人MTHFR與MTRR基因多態性表達的檢測試劑盒，其特征在于，所述A66G特異性上下游引物為MTRR-A66G-L、MTRR-A66G-R；所述A66G特異性探針為MTRR-A66G-P-W、MTRR-A66G-P-M。

7.根據權利要求1所述的一步逆轉錄RT-qPCR人MTHFR與MTRR基因多態性表達的檢測試劑盒，其特征在于，所述陽性對照是人基因組DNA、突變質粒；所述陰性對照是生理鹽水。

8.根據權利要求1所述的一步逆轉錄RT-qPCR人MTHFR與MTRR基因多態性表達的檢測試劑盒，其特征在于，所述One step酶混合液是Taq酶、M-MLV酶、Rnasin inhibitor、酶穩定劑的混合液。

9.一種權利要求1-8任一所述的檢測試劑盒的使用方法，包括以下步驟：

(1)RNA提取；

(2)試劑準備和加樣；

(3)上機檢測，進行PCR擴增及熒光采集；

(4)檢驗結果的解釋。

10.根據權利要求9所述的檢測試劑盒的使用方法，其特征在于，所述PCR擴增及熒光采集相關參數設置為：

逆轉錄 50℃30min；

預變性 95℃5min；

PCR 95℃15s；60℃40s；循環5次；

95℃15s；60℃40s；循環30次。