[發(fā)明專利]一株耐高溫釀酒酵母菌株及其構(gòu)建方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710461602.0
• 申請(qǐng)日: 2017-06-14
• 公開（公告）號(hào): CN107641604A
• 公開（公告）日: 2018-01-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 肖冬光;郝愛麗;董健;付肖蒙;郭學(xué)武;張翠英
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 天津科技大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N1/19
• 分類號(hào): C12N1/19;C12P7/06;C12R1/865
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.選育出的高耐受釀酒酵母菌株，是在釀酒酵母出發(fā)菌株中敲除SCH9基因獲得。

2.如權(quán)利要求1所述的高耐受釀酒酵母菌株，其特征在于，所述出發(fā)菌株為釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)CICC32315。

3.如權(quán)利要求1所述的高耐受釀酒酵母菌株，其特征在于，所述釀酒酵母具有正常的生長(zhǎng)性能，對(duì)55℃熱激以及8％(v/v)乙醇都有一定的耐受性，并在38℃玉米原料高溫濃醪發(fā)酵中乙醇產(chǎn)量相對(duì)親本菌株提高了16.4％。

4.如權(quán)利要求1所述的高耐受釀酒酵母菌株的構(gòu)建方法，其特征在于，所述構(gòu)建方法是通過長(zhǎng)引物敲除法，以酵母體內(nèi)固有的URA3基因作為篩選標(biāo)記，避免了外源基因的殘留。

5.如權(quán)利要求4所述的高耐受釀酒酵母菌株的構(gòu)建方法，其特征在于，具體步驟包括：本研究以SCH9基因作為靶序列，以提供的釀酒酵母工業(yè)菌株為出發(fā)菌株，以酵母體內(nèi)固有的URA3基因作為篩選標(biāo)記。使用帶有待敲除基因SCH9的40bp同源序列和帶有URA3基因的19bp同源序列的長(zhǎng)引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增得到帶有同源臂的片段，將重組片段利用醋酸鋰轉(zhuǎn)化法導(dǎo)入到感受態(tài)釀酒酵母細(xì)胞中，通過與酵母染色體上的同源序列發(fā)生重組，經(jīng)抗性板篩選出轉(zhuǎn)化子，通過PCR全長(zhǎng)驗(yàn)證得到AY12a-SCH9Δ突變菌株，即URA3基因替代了酵母染色體上的SCH9基因，從而實(shí)現(xiàn)了SCH9基因的敲除。將AY12a-SCH9Δ與AY12α進(jìn)行回交融合，然后再生孢分離單倍體，即獲得新的AY12a-SCH9Δ突變株及AY12α-SCH9Δ突變株。

6.如權(quán)利要求2所述的耐高溫釀酒酵母菌株在乙醇生產(chǎn)中的應(yīng)用。