[發明專利]一種膠原蛋白?硫酸乙酰肝素復合敷料的制備方法

在審

• 申請號: 201710459308.6
• 申請日: 2017-06-16
• 公開（公告）號: CN107441549A
• 公開（公告）日: 2017-12-08
• 發明（設計）人: 程詠梅;陸金婷;任偉業
• 申請（專利權）人: 無錫貝迪生物工程股份有限公司
• 主分類號: A61L26/00
• 分類號: A61L26/00;A61L24/00;A61L24/08;A61L24/10
• 代理公司: 北京聯瑞聯豐知識產權代理事務所(普通合伙)11411
• 代理人: 黃冠華

1.一種膠原蛋白-硫酸乙酰肝素復合敷料的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)、制備6～18mg/mL的膠原溶液，連續攪拌12h以上；

2)、將攪拌均勻的膠原溶液裝入離心杯中，離心，脫泡，然后灌注到模盒中，并冷凍干燥，得到膠原海綿；

3)、將冷凍干燥后的膠原海綿于110～125℃真空熱交聯48～72h；

4)、配置0.5～10mM的EDC/NHS交聯液，并添加膠原海綿質量的10～20％的硫酸乙酰肝素，攪拌溶解，放入膠原海綿二次交聯12～36h；

5)、棄交聯液，將膠原海綿先用注射水沖洗2～3遍，再置于注射水中清洗，每100片需15L～25L注射水，每隔3～4h更換一次注射用水，更換6～8次；

6)、將清洗完畢后的膠原海綿置于模盒中，鋪平整，并注入20～35mL注射水，使注射水浸潤海綿上表面，放入凍干機中，二次凍干；

7)、將二次凍干的海綿放入真空干燥箱內進行干燥；

8)、將凍干后膠原海綿裝入滅菌復合袋中，依次排列于壓制機板層中，壓制5～10min后，即可制得膠原蛋白-硫酸乙酰肝素復合敷料，裝入滅菌復合袋中，輻照滅菌。

2.如權利要求1所述的膠原蛋白-硫酸乙酰肝素復合敷料的制備方法，其特征在于，所述步驟1)中膠原溶液的制備方法包括以下步驟：

(1)取新鮮動物組織，切割清除油脂層和毛皮層，去除雜質，清洗，將組織破碎成小顆粒狀，按照固液比1:30～1:40的比例，加入0.01～0.03mol/L的氫氧化鈉水溶液，于6～8℃浸泡1～2小時，過濾，備用；

(2)在上述預處理后的組織中加入質量為組織質量6～8倍的無水乙醚或者丙酮，于35～40℃回流5～8小時，之后用蒸餾水沖洗至無異味，備用；

(3)將上述組織浸入0.6～0.7mol/L冰醋酸和600～700mg/L胃蛋白酶的混合液中，持續攪拌25～30小時；

(4)對上述混合物采用漸進式超聲波處理，先使用100～200W超聲處理30分鐘，再使用200～300W超聲處理30分鐘，最后使用300～400W超聲處理1小時；

(5)加入2～3％的H₂O₂溶液，混合靜置2～4小時，調節pH至5.0，離心；

(6)取上清液，加入NaCl，攪拌20～30小時，離心，沉淀物加入0.6～0.7moL/L冰醋酸溶解，離心，取上清液，調節pH至7.5，加入NaCl，攪拌20～30小時，離心；

(7)將步驟(6)得到的沉淀物溶解于0.6～0.7moL/L冰醋酸，先以0.6～0.7moL/L的冰醋酸為透析外液透析2次，每次4小時，再以蒸餾水為透析外液透析5～7次，每次4小時，至外液檢測不到氯離子，得到膠原液體。

3.如權利要求1所述的膠原蛋白-硫酸乙酰肝素復合敷料的制備方法，其特征在于，所述步驟2)中灌注到模盒中的膠原溶液充滿整個模盒，膠原液外觀應平整、均一，不得有氣泡。

4.如權利要求1所述的膠原蛋白-硫酸乙酰肝素復合敷料的制備方法，其特征在于，所述步驟7)中干燥的方法為，將真空干燥箱抽真空至90Kpa以上，并保持1h以上，升溫至80℃后恒溫2h以上，然后升溫至100～125℃，恒溫6～12h。