[發明專利]油酸誘導雞成肌細胞肌內脂肪沉積的應用及誘導方法

有效

• 申請號: 201710449147.2
• 申請日: 2017-06-14
• 公開（公告）號: CN107254434B
• 公開（公告）日: 2021-04-30
• 發明（設計）人: 黃華云;梁忠;劉龍洲;黎壽豐;趙振華;李春苗;王錢保;黃正洋;胡艷;許明;張丹;胡勇
• 申請（專利權）人: 江蘇省家禽科學研究所
• 主分類號: C12N5/077
• 分類號: C12N5/077
• 代理公司: 北京中濟緯天專利代理有限公司 11429
• 代理人: 馮慧云

本發明涉及油酸誘導雞成肌細胞肌內脂肪沉積的應用及誘導方法，本發明首次將油酸用于雞成肌細胞肌內脂肪沉積誘導，成功構建雞成肌細胞脂肪沉積體外細胞模型。本發明研究表明濃度為280umol/L?560umol/L的油酸誘導工作溶液，都能極顯著提高雞原代成肌細胞肌內脂肪的脂滴沉積，其中以420umol/L最為適合。

技術領域

本發明涉及油酸誘導雞成肌細胞肌內脂肪沉積的應用及誘導方法，屬于細胞生物學研究領域。

背景技術：

肌肉內脂肪是肉品質和風味的重要影響因素。肌肉中肌內脂肪含量與嫩度呈顯著正相關，且雞肉中肌內脂肪含量可以作為肉雞品質和風味的代表性特征指標。因此，肌內脂肪沉積的調控研究已成為肉雞遺傳中涉及雞肉品質的重要科學問題。

家禽區別于哺乳動物，雞的肌肉中肌內脂肪量極少，難以量化，因此，肌內脂肪細胞體外模型構建的難度較大，以致雞肌內脂肪沉積相關的候選基因的體外功能驗證及分子機制的研究難以很好的開展。因此，構建肌內脂肪沉積的細胞模型為體外水平研究肌內脂肪沉積的候選基因的功能及肌內脂肪沉積的分子機制具有重要意義。

發明內容

為了解決以上技術問題，本發明首次將油酸應用于雞成肌細胞肌內脂肪沉積的誘導培養中，成功構建了雞原代成肌細胞肌內脂肪沉積體外模型。

為此，本發明一方面提供油酸誘導雞成肌細胞肌內脂肪沉積的應用，具體地，油酸用于雞成肌細胞肌內脂肪沉積細胞體外模型的構建。本發明研究表明所述油酸的誘導工作溶液濃度為280umol/L-560umol/L，優選地，420umol/L誘導效果最好。

另一方面，本發明提供油酸誘導雞成肌細胞肌內脂肪沉積的方法，步驟如下：

(1)制備油酸儲存液：將1g油酸溶于5mL無水乙醇中，得到終濃度為0.7mol/L的油酸儲存液；

(2)采用0.2μm微孔濾膜過濾器對步驟(1)的油酸儲存液過濾后，置入滅菌后的無菌離心管中，密封，低溫保存待用；

(3)將10ml胎牛血清加到40ml DMEM/F12培養基中，得到終濃度為20％的全培養基溶液；

(4)將步驟(3)的全培養基溶液中加入步驟(2)的油酸儲存液，配制成濃度為280umol/L-560umol/L的油酸誘導工作溶液,用0.2μm微孔濾膜過濾器過濾，輕輕搖勻，待用；

(5)利用差速貼壁的方法，獲得細胞狀態較好的原代雞成肌細胞，待原代雞成肌細胞融合度在60％—70％時，加入步驟(4)中的油酸工作溶液進行誘導，每兩天換一次液；持續誘導5-6天。

優選地，步驟(4)配制成濃度為420umol/L的油酸誘導工作溶液。

誘導結束后用油紅O方法染色，檢測脂滴沉積情況。表明本發明方法可以成功用油酸誘導原代雞成肌細胞肌內脂肪的沉積。

本發明具有如下有益效果：

(1)本發明首次將油酸用于雞成肌細胞肌內脂肪沉積誘導，成功構建雞成肌細胞脂肪沉積體外細胞模型。雞的成肌細胞內脂肪量極少，克服了常規方法誘導脂肪沉積效果不夠理想的缺點。

(2)本發明油酸誘導雞成肌細胞肌內脂肪脂滴沉積的方法，能夠顯著地促進成肌細胞肌內脂肪脂滴沉積，而且保證細胞狀態不受影響。

(3)本發明方法簡便易行，成本低，效果顯著。

附圖說明

圖1為不同濃度的油酸誘導工作液誘導雞成肌細胞肌內脂肪脂滴沉積油紅O染色結果。

圖2為不同濃度的油酸誘導工作液誘導雞成肌細胞肌內脂肪脂滴沉積結果差異顯著性分析，不同字母表示差異顯著(p0.01)。