[發(fā)明專利]檢測(cè)體外受精風(fēng)險(xiǎn)的SNP遺傳標(biāo)記物和其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710436752.6
• 申請(qǐng)日: 2017-06-12
• 公開（公告）號(hào): CN109022564B
• 公開（公告）日: 2022-07-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳子江;馬金龍;趙涵;劉洪彬;于夢(mèng)汝;蘇獻(xiàn)偉;路鋼
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 山大生殖研發(fā)中心有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/6883
• 分類號(hào): C12Q1/6883;C12N15/11
• 代理公司: 北京漢昊知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11370
• 代理人: 黃可峻

本發(fā)明提供了檢測(cè)體外受精風(fēng)險(xiǎn)的SNP遺傳標(biāo)記物和其應(yīng)用。本發(fā)明提供了在外周血樣品中檢測(cè)人類體外受精風(fēng)險(xiǎn)的試劑盒和裝置，其包括檢測(cè)遺傳標(biāo)記的試劑，所述遺傳標(biāo)記選自以下IZUMO1R基因中的SNP的一個(gè)或多個(gè)：rs76779571、rs61742524、rs76781645和rs377369966。本發(fā)明還提供了檢測(cè)遺傳標(biāo)記的試劑在制備所述試劑盒和裝置中的用途。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及分子生物學(xué)和醫(yī)學(xué)檢測(cè)方法和裝置領(lǐng)域。具體的，本發(fā)明涉及包含能夠用于判斷體外受精風(fēng)險(xiǎn)的SNP遺傳標(biāo)記物和使用所述SNP遺傳標(biāo)記物的體外受精風(fēng)險(xiǎn)判斷的方法、用于該體外受精風(fēng)險(xiǎn)判斷方法的裝置和試劑盒。

背景技術(shù)

隨著輔助生殖技術(shù)(assisted reproductive technology,ART)的改進(jìn)和先進(jìn)設(shè)備的使用，成功的體外受精(in vitro fertilization,IVF)率已經(jīng)接近70％-80％【1】。然而，受精失敗(fertilization failure)和多精受精(polyspermy)仍然是引起IVF周期失敗的重要因素。

當(dāng)所有可用的卵母細(xì)胞不能都受精時(shí)即為受精失敗(fertilization failure)。IVF中，發(fā)生受精失敗的發(fā)生率為3.52％-20％【2】。與IVF受精失敗發(fā)生相關(guān)的卵母細(xì)胞因素包括透明帶(ZP)形成、配子識(shí)別和卵母細(xì)胞活化等調(diào)節(jié)機(jī)制異常。現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)位于卵母細(xì)胞膜上的一些受體涉及精卵識(shí)別和/或融合過程，包括CD9，ZP1，ZP2，ZP3和PTGER2【6】。

卵母細(xì)胞被兩個(gè)或多個(gè)精子受精時(shí)為多精受精【7，8】。在IVF周期中，多精受精發(fā)生率為3％-10％【9-11】。對(duì)多精受精的卵膜阻擋是通過一個(gè)相對(duì)快速作用的涉及卵膜的生化變化的阻擋，以及隨后的由卵泡活化后由皮質(zhì)顆粒釋放的酶引起的大約1小時(shí)的透明帶的緩慢硬化實(shí)現(xiàn)的。這種緩慢作用過程被稱為皮質(zhì)反應(yīng)(cortical reaction)【13】。多種與卵母細(xì)胞相關(guān)的因子與多精受精的發(fā)病有關(guān)，包括卵母細(xì)胞成熟程度，透明帶的分子生物學(xué)變化以及皮層反應(yīng)的變化【12-15】。有報(bào)道顯示磷脂酰肌醇信號(hào)通路在皮質(zhì)反應(yīng)中起重要作用，該途徑的改變可能破壞卵膜阻擋，導(dǎo)致多精受精【16】。

人的IZUMO1R基因(Gene ID:390243)由4個(gè)外顯子編碼，位于染色體條帶11q21上。由IZUMO1R基因編碼的JUNO(也稱為FOLR4)是卵母細(xì)胞表面上的糖磷脂酰肌醇(GPI)-錨定受體，對(duì)于受精是必需的【17-19】。在小鼠中，蛋白質(zhì)JUNO是三種葉酸受體旁系同源物之一，其主要作用與葉酸攝取有關(guān)。然而，有研究表明，與FOLR1和FOLR2不同，JUNO無法與葉酸結(jié)合。在JUNO-/-雌性小鼠中，無透明帶卵母細(xì)胞不與野生型精子融合，導(dǎo)致受精不成功。此外，JUNO和IZUMO1之間的相互作用是配子識(shí)別的重要分子基礎(chǔ)，這種相互作用在包括人類在內(nèi)的幾種哺乳動(dòng)物物種中是保守的。受精后，JUNO迅速從卵膜中消失，說明可能存在JUNO在哺乳動(dòng)物中參與了阻止多精受精發(fā)生的機(jī)制【18】。

體外受精的風(fēng)險(xiǎn)(特別是發(fā)生受精失敗和多精受精的風(fēng)險(xiǎn))的檢測(cè)方法及檢測(cè)程序還存在很多需要解決的問題。因此本領(lǐng)域還需要一種更快速和有效的判斷體外受精的風(fēng)險(xiǎn)的方法和試劑盒或裝置。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供了一種用于判斷體外受精的風(fēng)險(xiǎn)的遺傳標(biāo)記物和應(yīng)用。具體的，本發(fā)明提供了能夠用于判斷體外受精風(fēng)險(xiǎn)的SNP遺傳標(biāo)記物和使用所述SNP遺傳標(biāo)記物的體外受精風(fēng)險(xiǎn)判斷方法、用于該體外受精風(fēng)險(xiǎn)判斷方法的裝置和試劑盒，例如用于在外周血樣品中判斷體外受精的風(fēng)險(xiǎn)，特別是受精失敗或多精受精的風(fēng)險(xiǎn)的裝置和試劑盒。