[發明專利]一種具有靶向功能仿病毒結構高分子囊泡及其制備與應用

在審

• 申請號: 201710427608.6
• 申請日: 2017-06-08
• 公開（公告）號: CN107141492A
• 公開（公告）日: 2017-09-08
• 發明（設計）人: 王林格;司自衛;李衛昌
• 申請（專利權）人: 華南理工大學
• 主分類號: C08J3/03
• 分類號: C08J3/03;C08J3/07;C08G81/00;C08G81/02;C08L67/04;C08L87/00;A61K9/127;A61K47/36;A61K47/34;A61P35/00
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司44245
• 代理人: 陳智英

技術領域

本發明屬于高分子材料領域，涉及一種具有靶向功能仿病毒結構高分子囊泡及其制備方法，具體涉及一種由透明質酸接枝的兩親性嵌段共聚物與其他兩親性嵌段共聚物混合自組裝成具有仿病毒表面突觸結構的高分子囊泡及其制備方法與應用。

技術背景

惡性腫瘤是一種是危害人類生命健康的嚴重疾病，其防治仍依然是當今生命科學研究領域的一個難點。常規的化學療法是一種全身性的療法，在相關治療手段中是首選，適用于大部分實體腫瘤或血液腫瘤。然而，已知的化療藥物仍普遍存在毒性強、對腫瘤靶向識別性差的問題，在殺死腫瘤細胞的同時也對人體正常組織細胞造成很大的傷害。長期治療更會致使腫瘤細胞產生耐藥性，對人體的毒副作用很大等缺點。因此，如何選擇性地殺死腫瘤細胞而不造成機體正常組織細胞損傷成為治療的關鍵問題。選擇性或針對腫瘤細胞進行靶向治療是解決此關鍵問題的首選途徑。在自然界中，病毒是一種具有靶向性的基因載體，其主要由核酸分子和蛋白構成的外衣殼組成。病毒衣殼能屏蔽環境中的潛在破壞因素，如核酸酶、酸堿度等，具有保護基因遺傳物質的功能，同時直接參與病毒的感染過程，實現對宿主細胞表面的特異性吸附。受病毒結構和功能的啟示，科學家們一直在不斷嘗試各種人工仿病毒結構和功能的自組裝聚集體用于藥物控釋和靶向治療的藥物載體，其中以高分子囊泡最為典型。高分子囊泡是一類由雙親性嵌段共聚物有序組合而成的中空球體，其球體的外殼膜層由雙親性分子構成，而內部親水空腔可以用于包裹藥物。高分子囊泡膜結構可分為三層：兩個內外側的親水層和一個處于內外親水層中間的疏水層，疏水層由于內外表面的親水層保持穩定。通常，高分子囊泡是由單一種類的兩親性嵌段共聚物自組裝而成，其囊泡表面呈“光滑”狀態。而本發明通過兩種及以上嵌段共聚物制備的仿病毒核衣殼及表面刺突結構的高分子囊泡是一種非常具有潛力的藥物載體。高分子囊泡可通過“特洛伊木馬”策略包載基因、藥物，并避免其中體內循環中被免疫系統辨識、吞噬。此外，通過嵌段共聚物設計與合成，如對進行功能基團接枝修飾，可使高分子囊泡表面帶有特定功能性配體從而具有對特定細胞的靶向性。

目前，同時具有針對腫瘤細胞靶向功能以及仿病毒結構高分子囊泡還未見有公開報道。

發明內容

基于獲得結構與功能上仿病毒結構，同時賦予高分子囊泡靶向腫瘤細胞功能的需求，本發明的目的在于提供一種含有透明質酸接枝嵌段共聚物構建的具有腫瘤細胞靶向功能及仿病毒結構的高分子囊泡的制備方法。

本發明的另一目的在于提供由上述方法得到的具有靶向功能仿病毒結構高分子囊泡。

本發明的目的通過以下技術方案實現：

一種具有靶向功能仿病毒結構高分子囊泡的制備方法，具體包括以下步驟：

S1：將含有氨基的透明質酸(HA)與含有羧基的疏水性聚合物進行酰胺反應，得到透明質酸(HA)接枝的兩親性嵌段共聚物；所述含有羧基的疏水性聚合物在反應之前需進行羧基活化處理；

S2：將透明質酸HA接枝的兩親性嵌段共聚物與其他兩親性嵌段共聚物通過溶劑交換法或水合法制備成具有靶向功能仿病毒結構高分子囊泡。

步驟S1中所述含有氨基的透明質酸是通過二元胺與透明質酸反應得到。所述二元胺的結構為H₂N-R-NH₂，R為有機基團；所述二元胺優選為脂肪二元胺，更優選為丁二胺。

步驟S1中所述含有氨基的透明質酸的具體制備步驟為：

將透明質酸溶于緩沖溶液中，加入二元胺，恒溫攪拌，加入還原劑反應，反應完成后透析，凍干，得到端氨基化透明質酸即含有氨基的透明質酸。

所述恒溫攪拌的溫度為40～60℃，優選為50℃；所述恒溫攪拌的時間為20～36h，優選為24h；

所述二元胺優選為1,4-丁二胺；所述還原劑為硼氰化鈉；

所述反應的時間為2～4天，優選為3天，所述還原劑分2～4次加入；

所述緩沖溶液優選為醋酸鹽緩沖液。

所述透明質酸HA和二元胺摩爾比為1:(1～5)，還原劑與透明質酸質量比為(1～3):5。

步驟S1中所述含有羧基的疏水性聚合物在反應之前需進行羧基活化處理，活化處理具體為：在有機溶劑中，采用活化劑將含有羧基的疏水性聚合物進行羧基活化，得到羧基活化的產物；所述活化劑為1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)與N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)。

所述羧基活化的時間為10～36h，優選為24h。

所述含有羧基的疏水性聚合物、EDC與NHS的摩爾比為(1～2.5):5:5；