[發明專利]一種發酵制備雞血液體肥料的方法

在審

• 申請號: 201710427140.0
• 申請日: 2017-06-08
• 公開（公告）號: CN107099480A
• 公開（公告）日: 2017-08-29
• 發明（設計）人: 岳喜慶;梁肖娜;楊梅;楊寧;烏日娜;李春強
• 申請（專利權）人: 沈陽農業大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/14;C05F15/00;C05F1/00;C05F11/08;C12R1/07;C12R1/80;C12R1/66;C12R1/01
• 代理公司: 沈陽科威專利代理有限責任公司21101
• 代理人: 張述學

1.一種發酵制備雞血液體肥料的方法，其特征在于包括以下步驟：

（1）雞血發酵前處理：將新鮮雞血放置在已滅菌好的盛放器皿內，加蓋保鮮膜，放置在無菌室內，在室溫下自然發酵30天；

（2）菌種培養和分離：將發酵的樣品充分攪拌混勻后，采用10倍梯度稀釋法將樣品分別涂置A細菌平板培養基、B霉菌平板培養基上，并分別在細菌、霉菌適宜的溫度條件下培養；

（3）菌種純化：將上述（2）中培養的優勢菌種分別純化分離，純化三代置于4℃冰箱中保存備用；

（4）優勢菌種篩選：將上述（3）中得到的優勢菌種經過菌株解磷、解鉀、固氮試驗、透明圈試驗、蛋白質含量測定、可溶性蛋白質含量、氨基酸態氮含量的相關指標進行測定篩選，最終得到細菌A₇，A₈，霉菌B₁、 B₄四種菌株為優勢菌株；

（5）優勢菌株鑒定：菌株的初步鑒定通過生理生化試驗對照《伯杰細菌鑒定手冊》和《真菌鑒定手冊》，細菌和霉菌分別采用16SrDNA擴增和ITS擴增、測序，得出細菌A₇ 為蘇云金芽孢桿菌菌株； A₈為希瓦氏菌株；霉菌B₁為青霉菌屬；B₄為塔賓曲霉；

（6）優勢菌株發酵雞血最佳條件篩選：在發酵過程當中，分別以發酵溫度、時間、接種量、轉速為因素，采用響應面法確定最佳條件，最終得出在溫度為32℃、接種量為1%、轉速為200rpm的條件下培養5天時發酵效果最佳；

（7）將新鮮的雞血在上述篩選的條件下進行大批的發酵培養最終得到雞血液體肥料。

2.根據權利要求1所述的一種發酵制備雞血液體肥料，其特征在于改良察式培養基為：雞血2g、磷酸氫二鉀1g、七水硫酸鎂0.5g、氯化鉀0.5g、硫酸亞鐵0.01g、蔗糖30g，分別溶解于1000ml蒸餾水中，充分溶解后加入瓊脂15-20g。