[發明專利]mir?490?5p在治療肝癌中的用途

在審

• 申請號: 201710426192.6
• 申請日: 2017-06-08
• 公開（公告）號: CN107334776A
• 公開（公告）日: 2017-11-10
• 發明（設計）人: 李霄;陶開山;竇科峰;丁睿;張玄;白鴿;賴全友;范明
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第四軍醫大學第一附屬醫院
• 主分類號: A61K31/7105
• 分類號: A61K31/7105;A61P35/00;A61P1/16;C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 北京譽加知識產權代理有限公司11476
• 代理人: 魯云博

技術領域

本發明屬于分子生物學領域，涉及mir-490-5p在制備治療肝癌的藥物組合物中的用途。

背景技術

肝癌是我國最常見的惡性腫瘤之一，其中肝細胞性肝癌是肝癌最主要的類型，在我國占原發性肝癌的90％。肝細胞性肝癌的發病率和死亡率均很高，肝癌的高轉移性是其致死率的重要原因。因而，抑制肝癌的轉移、增殖和侵襲是肝癌治療的重要途徑。

miRNA是一類內源性的、不參與蛋白質編碼的小RNA分子，其長度大約有18-25個核苷酸。miRNA前體，經酶切割為成熟miRNA。后者與相關蛋白一起組成RNA-誘導沉默復合體(RISC)，調控其靶基因的表達。miRNA調控靶基因的方式有兩種：與靶基因mRNA的3’UTR結合導致其降解；與靶基因mRNA 3’UTR結合抑制其翻譯。在植物中比較普遍的沉默機制中，miRNA和靶基因mRNA幾乎完全配對時，誘導其降解。然而大多數哺乳動物是通過不完全的配對結合，從而在轉錄后水平抑制基因翻譯。除此之外，miRNA還可通過促進靶mRNA polyA尾的去除，mRNA快速脫腺苷酸化促進了其被3’核酸外切酶水解。人類的miRNA由2％的基因編碼，卻能調控人體約30％的基因。多種miRNA已被報道在腫瘤發生中參與調節相關基因的表達。非編碼miRNA在調控EMT的細胞信號通路中具有重要作用。例如miR-200和miR-205抑制ZEB1和ZEB2，后者調控E-cadherin的表達，由此維持上皮細胞的表型。

鑒于miRNA在癌癥發生發展的重要作用，已有多位研究者對肝癌與miRNA的關系做了深入研究，發現了部分與肝癌相關的miRNA，這些miRNA的表達在轉移性肝癌中下調明顯。然而目前的工作僅是冰山一角。

發明內容

經過對肝癌發病機理的多年研究，本發明人發現mir-490-5p在原發性肝癌細胞中下調明顯，并且對于肝癌細胞的增殖和侵襲有抑制作用。基于此，本申請的目的是提供一種新的治療肝癌的方式。

由此，本發明的第一個目的是提供mir-490-5p在制備治療肝癌的藥物組合物中的用途。

優選地，所述mir-490-5p的序列如SEQ ID NO:1所示。

優選地，所述治療是通過抑制肝癌細胞的增殖與侵襲實現的。

優選地，所述肝癌為原發性肝癌。

本發明的第二個目的是提供一種用于治療肝癌的藥物組合物，所述藥物組合物包含治療有效量的mir-490-5p及其藥學上可以接受的輔料。

優選地，所述mir-490-5p的序列如SEQ ID NO:1所示。

本發明的第三個目的是提供檢測mir-490-5p的特異性擴增引物，所述特異性擴增引物包括上游引物和下游引物。

優選地，所述上游引物的序列如SEQ ID NO:2所示；所述下游引物的序列如SEQ ID NO:3所示。

本發明的第四個目的是提供檢測mir-490-5p的試劑盒，所述試劑盒包括本發明的檢測mir-490-5p的特異性擴增引物。

本發明人通過大量實驗發現，mir-490-5p能夠抑制肝癌細胞的增殖與侵襲，從而使肝癌細胞凋亡。特別地，可以使肝癌細胞系HepG2凋亡57.6％，使SMMC7221凋亡43.9％，說明mir-490-5p或其類似物能夠用于制備治療肝癌的藥物組合物，也可以構建它的表達載體，用于基因治療。本發明的mir-490-5p對肝癌細胞的抑制效果顯著，為肝癌的治療提供了新的途徑。

具體實施方式

通過下面給出的具體實施例，可以進一步說明本發明，但不以任何方式限制本發明。

本發明人對大量原發性肝癌病例的基因表達進行分析，發現mir-490-5p在大部分研究的肝癌病例細胞中下調。因此，本發明人展開進一步的研究，探索mir-490-5p與肝癌之間的相關性。

在本發明中，mir-490-5p的序列為：ccauggaucuccaggugggu(SEQ ID NO:1)。

本發明進一步提供mir-490-5p的特異性擴增引物，其包括上游引物和下游引物。其中，所述上游引物的序列為：ctccagctgggccatggatc(SEQ ID NO:2)，所述下游引物的序列為：tggtgtcgtggagtcg(SEQ ID NO:3)。

本發明中，所述藥物組合物中的治療有效量是本領域技術人員可以根據制藥領域的要求和治療效果來判斷和確定的。

本發明中所述的表達載體為miRNA表達載體，本領域技術人員根據miRNA的莖序列可以設計出合適的表達載體。