[發明專利]提高隱孢子蟲和賈第蟲檢測回收率的洗脫液及洗脫方法

有效

• 申請號: 201710423364.4
• 申請日: 2017-06-07
• 公開（公告）號: CN107271413B
• 公開（公告）日: 2020-04-14
• 發明（設計）人: 任剛
• 申請（專利權）人: 暨南大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64;G01N1/34
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司 44245
• 代理人: 雷月華;陳燕嫻

本發明具體涉及一種提高隱孢子蟲和賈第蟲檢測回收率的洗脫液及洗脫方法。所述洗脫液包括如下重量百分比的組分：1?2％異戊醇，1?2％NaCl，0.2?0.5％的己炔二醇、甲基己炔二醇或二甲基己炔二醇中的一種，0.1?0.2％亞氨基二琥珀酸四鈉，0.2?0.5％聚磷酸鈉，2％?4％EDTA，余量為水。本發明洗脫方法適用于飲用水中隱孢子蟲卵囊和賈第蟲孢囊的快速風險評估與預警，應用成本低廉，操作簡便易行，使用安全可靠，具有廣闊的應用前景。對比實驗表明，采用本發明洗脫方案可將隱孢子蟲卵囊的回收率提高至30?50％；賈第蟲卵囊回收率提高至35?50％，超過EPA1623規定的20％限值；操作成本沒有明顯變化。

技術領域

本發明屬于涉及飲用水水質檢測及水處理領域，具體涉及一種提高隱孢子蟲和賈第蟲檢測回收率的洗脫液及洗脫方法。

背景技術

賈第鞭毛蟲(G.lamblia)和隱孢子蟲(Cryptosporidium)是一類寄生于人和動物體內的腸道原蟲(以下簡稱“兩蟲”)，也是引起人類非病毒性腹瀉的最主要病原生物。水環境中賈第鞭毛蟲和隱孢子蟲污染非常普遍，尤其是當地表水受生活污水或農業污水污染的情況下更為嚴重。由于“兩蟲”主要以飲水為傳播媒介，預防“兩蟲”病爆發的關鍵是確保飲用水的安全。因此世界各國包括我國在內均對其飲水中的濃度做了相應規定，如目前我國“生活飲用水衛生標準”(GB5749-2006，非常規指標)和美國EPA給定的限值均為＜1個/10L水。目前對其檢測方法很多，主要有以金胺-酚染色、改良抗酸染色、金胺-酚改良抗酸復染等為代表的染色鏡檢方法，以及常規PCR、MS-PCR、RT-PCR、Nested-PCR、熒光定量PCR和生物探針技術等為代表的分子生物學檢測方法。不管采用何種檢測方法，對“兩蟲”卵囊的分離與富集是保證檢測結果的可靠性和可行性的關鍵問題。

目前“兩蟲”卵囊分離純化的浮選方法主要包括甘油飽和鹽水漂浮法、不連續蔗糖密度梯度離心法、CsCl密度梯度離心法、飽和糖水漂浮法等(宋丹等.隱孢子蟲檢測方法研究進展)；或通過表面抗原抗體結合方法將目的抗原吸附分離出來，主要包括免疫磁珠分離法(崔艷梅.水環境中賈第鞭毛蟲和隱孢子蟲檢測方法的研究進展)；或采用濾芯、膜濾方式對水樣進行分離富集。甘油飽和鹽水漂浮法主要用于隱孢子蟲的初步檢測，但由于卵囊為無色透明的小球體，增加了檢測難度；同時由于水樣的采樣量通常都很大(10-100L以上)，因此密度梯度離心法、飽和糖水漂浮法實際操作難度都很大，同時也容易產生二次污染。EPA1623推薦的膜濾操作克服了以上富集方法的缺點，已被各國供水行業廣泛采用，但卵囊回收率應僅為20％-50％，主要損失在過濾濃縮環節。筆者在實驗中也證實，傳統機械式振蕩洗脫難以將兩蟲從濾膜表面洗脫。有研究者從提高洗脫液角度提出了改進措施，但回收率仍不夠理想；本技術對洗脫方式和洗脫液組分進行了改進，提高了回收率。

發明內容

為解決現有技術的缺點和不足之處，本發明的首要目的在于提供一種提高隱孢子蟲和賈第蟲檢測回收率的洗脫液。

本發明的另一目的在于提供一種提高隱孢子蟲和賈第蟲檢測回收率的洗脫方法，適用于飲用水中隱孢子蟲卵囊和賈第蟲孢囊的快速風險評估與預警。該方法應用成本低廉，操作簡便易行，使用安全可靠，具有廣闊的應用前景。

本發明目的通過以下技術方案實現：

一種提高隱孢子蟲和賈第蟲檢測回收率的洗脫液，所述洗脫液包括如下重量百分比的組分：1-2％異戊醇，1-2％NaCl，0.2-0.5％的己炔二醇、甲基己炔二醇或二甲基己炔二醇中的一種，0.1-0.2％亞氨基二琥珀酸四鈉，0.2-0.5％聚磷酸鈉，2％-4％EDTA，余量為水。

一種提高隱孢子蟲和賈第蟲檢測回收率的洗脫方法，包括以下步驟：