[發(fā)明專利]一種不使用化學藥品低溫制備肝細胞提取物的新技術

在審

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• 申請日: 2017-05-25
• 公開（公告）號: CN108929368A
• 公開（公告）日: 2018-12-04
• 發(fā)明（設計）人: 阿拉阿貝德卡里姆穆罕默德福阿德;馬穎;戴安娜
• 申請（專利權）人: 廣州資生生物科技有限公司
• 主分類號: C07K1/14
• 分類號: C07K1/14;C12N9/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

一種不使用化學藥品低溫制備肝細胞提取物的新技術，只采用機械或天然的提取方法從肝細胞中提取最大數(shù)量酶和多肽，可提取出細胞器內部的酶和多肽，且提取的提取物絕無細菌，病毒，真菌或毒素。提取過程嚴格按照最新的GMP標準和補充要求執(zhí)行，忠于患者的安全和療效。

技術領域

本發(fā)明的技術領域為生物分子制造產業(yè)。

背景技術

從活細胞中提取蛋白質，不管是從動物來源還是細菌，都是所有的科學家所面臨的一大挑戰(zhàn)。理論上講，似乎提取蛋白質是很簡單的事情，實際上也確實如此。然而，如果保證所提取出的蛋白質的數(shù)量和價值依然是一大難點。

簡單來說，將細胞置于低滲溶液中將導致活細胞膨脹，從而導致細胞膜破裂，釋放出細胞質及蛋白質。

發(fā)明內容

目前分離細胞蛋白質仍然采用傳統(tǒng)途徑，所有從組織中提取蛋白質的方案都含有緩沖液或使細胞溶解的化學藥品。那些沒有用到化學藥品的方案很難提取出大量的蛋白質。如果樣品為組織樣品而不是采自單獨的或培養(yǎng)細胞就必須用到蛋白酶。某些方案提到使用聲波解降法打破細胞膜和細胞器。聲波解降法看來是個完美的方案，但是組織以及采用樣品的性質卻在聲波解降法實施過程中給預期的完美效果制造了不便。大組織樣品對聲波解降法反應不大，且會遺留組織塊殘片。

總的來說，從器官內提取蛋白質的存在以下五大難點：

1.時間因素

2.器官的性質

3.添加的化學藥品難以清理

4.蛋白質的數(shù)量和質量

5.蛋白質的特定性

時間因素：

這是最主要的一個難點。此時間特指從動物被屠宰到提取最終步驟完成之間的時間。提取多肽的質量差異會很大。器官如果立即摘取或-85度冷凍，酶的活性才得以保存而不至被細菌破壞。通常如果摘取不當，器官至多存活6小時。6小時時間看來不短，但一旦關系到組織的處理就顯得很短了。冷凍是保持器官存活以及細胞酶和多肽活性的唯一方案。冷凍或保存在特定溫度限制以下又是另外一大難題，特別是實驗室的管理流程可導致大幅度升溫。

器官的性質：

從動物身上摘取器官過程復雜，需保持器官和重要解剖結構的完整性。例如摘取大腦就異常復雜。大腦是個重要的器官，脆弱且結構不分明。它位于顱骨中間，通過腦干連接脊髓，并通過視神經(jīng)連接眼睛。摘取和保存的過程需同步進行。如此復雜的結構容易在摘取過程中導致肝的部分活性結構被損壞。同時，摘取過程中大腦組織的脆弱性也是亟需解決的一大難題。添加的化學藥品難以清除：

從細胞中提取蛋白質的環(huán)節(jié)必須使用化學藥品的兩個原因：清除器官上的血液以及切斷細胞間的結締組織鏈。任何器官內都含有一定的血液。不同器官的含血量也各有不同，肝臟，心臟，脾臟中含血量較多，肝和胸腺含血量相對較少。蛋白質提取環(huán)節(jié)中無論血液含量多少都需要將它從組織中清除。大多數(shù)常用方案使用化學試劑作為裂解緩沖液清除紅細胞含量，離心機清除血紅蛋白的含量。無論該方案如何精確，裂解緩沖液在溶液中始終留有殘余。

切斷細胞鏈促使細胞破裂的裂解緩沖液也有同樣的化學藥品殘留問題。

蛋白質的數(shù)量和質量：

大多數(shù)人對數(shù)量和質量都難以取舍。提取的主要目的就是獲得大量的活性蛋白。那么難題又來了，實驗室過程的本性會讓溶液的溫度升高，從而破壞酶或導致蛋白質本性被破壞。因此，所有的操作應在低于10度的環(huán)境下進行，否則蛋白質的質量將大打折扣。

我們的中德合作團隊在研究從肝細胞提取蛋白質的生產中決定正面出擊解決所有的難題。以我們的產品“CMDA OE肝細胞萃取”為例，研究方向從以下幾個因素出發(fā)：

1.不使用任何化學藥品。